[发明专利]褪黑素快速检测方法及其检测卡和制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，具体的说，是一种褪黑素的快速检测方法及试剂盒，属于生物检测技术领域。

背景技术

褪黑素又称松果体素，化学名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺，是人体大脑内松果体分泌的一种吲哚胺类激素。其分泌随着光照的增加而减少，故又被称为黑暗荷尔蒙。褪黑素主要用于调节人体的清醒和睡眠周期，诱导生理睡眠，以及抗衰老等。

褪黑素是一种内源性激素，有研究表明，大量使用褪黑素可能会引发呼吸问题，产生宿醉效应，同时褪黑素会影响某些镇静安眠药物如氯硝西泮的作用。在欧洲，褪黑素的服用周期、适用人群以及剂量均有严格限制。在美国，褪黑素以膳食补充剂的形式销售，但其说明书上需明确标示含量及使用剂量。在我国，褪黑素仅可作为保健食品，且有明确的使用规定：日服用剂量为1～3mg，不得添加除维生素B6以外的其他成分，注意事项中应注明从事驾驶、机械作业或危险操作者不要在操作前或操作中食用，自身免疫症（类风湿等）及甲亢患者慎用。故当需服用褪黑素时最好遵循医嘱，以明确使用剂量，儿童使用更需要谨慎。

但是近年来，一些不法分子利用褪黑素的镇静、催眠的良好作用和健康产品成分复杂的特点，在镇静催眠类健康产品中擅自添加褪黑素，服用者在不知情的情况下服用该类产品，易引发不良后果，给人民群众的身体健康造成了严重危害。

目前，在镇静安神类中成药和保健食品中是否掺杂褪黑素的检测方面主要有以下几种方法：

1、理化反应的快速筛查方法

样品中的待测成分经乙酸乙酯提取后，向提取液中加入对二甲氨基肉桂醛盐酸乙醇溶液，通过观察溶液颜色的变化来判断，样品中是否含有褪黑素化学成分。若溶液颜色在30秒内呈现明显蓝色至绿色，则提示样品中可能含有褪黑素成分。

该方法的优点在于不需要昂贵的分析仪器，检测成本低，可快速、简便的进行检测，对环境的要求不高，对操作人员的专业要求也不高，可满足现场检测的需求。但该方法也存在以下缺点：

试剂以对二甲氨基肉桂醛盐酸乙醇溶液为显色剂，该试剂的稳定较差，长时间放置容易导致试剂灵敏度不足，需临用前配制，对于现场检测来说较为繁琐。

试剂中使用的盐酸乙醇溶液，具有一定的腐蚀性，并且提取剂乙酸乙酯，具有一定的气味，对于现场操作人员具有一定的危害性。而且方法的灵敏度较低，受样品本身的颜色干扰较大，影响实验结果的判断，容易产生误判。

2、薄层色谱法

样品中的待测成分经过甲醇提取，所得供试品溶液与对照品溶液在硅胶板上经展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视。在展开剂的作用下，由于不同物质的迁移速度不同，不同物质在薄层色谱板上的不同位置以斑点的形式出现，根据待测样品是否在与对照品相应的位置出现斑点这一实验现象来判断待测样品中是否含有目标成分。如果供试品溶液薄层色谱图与褪黑素对照品相应位置出现斑点，则提示样品中可能含有褪黑素成分。

薄层色谱法的优点是不需要昂贵的分析仪器。该法缺点是：色谱分辨率较低，中成药成分复杂，干扰因素多，容易产生误判。

色谱展开和晾干所需时间较长，不足以满足快速测定的要求。薄层色谱板需要烘干并干燥存放，分离效果受环境因素影响较大，不适合现场检测。需要有固定的场所，不合适作流动性大的现场检测。对检测人员的专业技术要求较高，不适合基层人员现场操作。

3、高效液相色谱法

高效液相色谱法是常用的现代分析方法，在相同的色谱条件下，不同的物质有不同的色谱保留时间。在相同的色谱条件下褪黑素对照品溶液与样品提取所得供试品溶液分别进样，根据色谱保留时间可判断待测样品是否含有褪黑素成分。

高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高、灵敏度高。但目前也存在以下缺点：仪器价格昂贵，样品前处理时间长，色谱柱易受污染，分析成本高；当共存成分的色谱峰保留时间与褪黑素色谱保留时间接近时容易造成误判；仪器对环境的要求高，需固定放置，不适合现场检测。

4、高效液相色谱-质谱联用法

以高效液相色谱仪作为分离器，质谱仪作为分析器的高效液相色谱-质谱联用法适合于成分复杂、背景干扰严重的样品分析，这种分析方法可提高检测结果的可靠性。但高效液相色谱-质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱更高，操作更加复杂的分析方法。仪器对环境的要求更高，需要固定放置，不合适现场检测。目前这些检验只能在少数实验室中进行，不易推广使用。