[发明专利]一种肝癌早期诊断试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的诊断试剂盒组成如下：酶标多肽抗体,包被缓冲液,清洗液,显色液,封闭液,终止液和抗原包被的酶标板。

2.根据权利要求1所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的酶标多肽抗体具体制备方法为：

（1）以合成肽Rep5为抗原免疫BALB/c小鼠，BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体，并制备小鼠腹水抗体，通过Pmtein G柱将腹水抗体进行亲和纯化；

（2）采用辣根过氧化酶标记抗体。

3.根据权利要求2所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的小鼠腹水抗体效价为1：2000000-1：5000000。

4.根据权利要求1所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的包被缓冲液为PBS缓冲液。

5.根据权利要求1所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的清洗液为含有0.05%-0.1%Tween 20的PBS溶液。

6.根据权利要求1所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的显色液为TMB显色液。

7.根据权利要求1所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的封闭液为The Blocking Solution封闭液。

8.根据权利要求1所述的一种肝癌早期诊断试剂盒，其特征在于，所述的终止液为2-3mol/L的硫酸。

9.采用如权利要求1-8任一所述的试剂盒进行检测的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）在抗原包被的酶标板中加入封闭液200-300ul，37℃静置10-15min；弃封闭液，采用清洗液清洗3-5次；

（b）加入100-200ul的酶标多肽抗体，37℃静置10-15min，弃酶标多肽抗体，采用清洗液清洗3-5次；

（c）加入100-200ul显色液，37℃避光孵育10-15min显色；

（d）加入50-100ul终止液终止反应；

（e）采用酶联检测仪测定吸光度值。

10.根据权利要求9所述的检测方法，特征在于，吸光度值的测定波长为455nm。