[发明专利]一种马属动物胚胎切割操作液配制方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于动物胚胎移植领域，特别是涉及一种马属动物胚胎切割操作液及其配制方法和应用。

背景技术

胚胎分割技术（Embryo bisection）是借助显微操作技术或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植给受体母畜，从而获得同卵双胎或多胎的生物学新技术。来自同一胚胎的后代有相同的遗传物质，因此胚胎分割可看成动物无性繁殖或克隆的方法之一。

胚胎分割操作液是用于获取胚胎后进行胚胎分割操作时营养保护性液体。胚胎分割操作液多数为组织培养液，目前国内常用的胚胎切割操作液主要有杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS）、布林斯特氏液、合成输卵管液（SOF）、惠屯氏液、Ham’s F-110以及TCM-199。上述几种液体均存在药品来源困难，价格昂贵，配制步骤繁琐且需现用现配等问题，为胚胎移植的规模化生产带来极大的不便。

 发明内容

为了解决传统的胚胎分割操作液药品来源困难、价格昂贵、配制步骤繁琐且需现用现配等问题，本发明提供了一种适用于规模化生产的马属动物非手术法胚胎移植用胚胎切割操作液及其配制方法和应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种马属动物胚胎分割操作液，所述胚胎切割操作液包括乳酸钠混合液、青霉素、链霉素，以及牛血清白蛋白或犊牛血清或灭活马血清中的一种、两种或三种。

所述乳酸钠混合液包括乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁和黄芪多糖中的一种或多种。

所述胚胎切割操作液中各组分的含量为：每1000ml乳酸钠混合液中含有青霉素30-180万单位、链霉素20-200万单位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犊牛血清0.5%-15%和/或灭活马血清0.5%-14%。其中，所述血清白蛋白、所述犊牛血清以及所述灭活马血清的百分比为体积百分比。

所述胚胎分割操作液中各组分的含量为：每1000ml乳酸钠混合液中含有青霉素50-150万单位、链霉素50-150万单位，以及牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犊牛血清1%-10%和/或灭活马血清1%-10%。其中，所述血清白蛋白、所述犊牛血清以及所述灭活马血清的百分比为体积百分比。

所述乳酸钠混合液中各组分的含量为：每1000ml混合液中含有乳酸钠1-7g、氯化钠1-5g、氯化钾2-7g、氯化钙0.5-2g、氯化镁0.05-0.5g和黄芪多糖0.01-0.3g。

所述乳酸钠混合液中各组分的含量优选为：每1000ml混合液中含有乳酸钠3-7g、氯化钠2-5g、氯化钾3-7g、氯化钙0.5-1.5g、氯化镁0.1-0.4g和黄芪多糖0.01-0.1g。

所述乳酸钠混合液中各组分的含量还可以优选为：每1000ml混合液中含有乳酸钠5.4g、氯化钠3.2g、氯化钾4.6g、氯化钙1.1g、氯化镁0.32g和黄芪多糖0.08g。

为了更好的实现上述发明目的，本发明还提供了一种马属动物胚胎切割操作液的配制方法，包括：

（1）按照各组分的含量称取乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化镁，并加入蒸馏水混合，置于37℃的恒温箱中0.5-6小时后，备用；

（2）称取黄芪多糖放入无菌烧杯中，向无菌烧杯中加入步骤（1）中得到的混合液，搅拌使黄芪多糖充分溶解，得到乳酸钠混合液；

（3）胚胎分割操作前，按照组分含量向乳酸钠混合液中加入青霉素、链霉素以及牛血清白蛋白、犊牛血清和灭活马血清中的一种或两种或三种，即可得到胚胎分割操作液。

本发明的马属动物胚胎切割操作液适用于马、牛、驴的非手术法胚胎移植技术。

 本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明以乳酸钠混合液作为主液，可提前配制待用，使用前只需向主液中加入适量抗生素及牛血清白蛋白或犊牛血清或灭活马血清即可。具有取材方便、价格低廉、配制简单、使用方便等优点，非常适用于马属动物非手术法胚胎移植的规模化生产，有利于胚胎移植技术的推广应用。

 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步描述。

 实施例1

一种马属动物胚胎分割操作液，包括5000ml乳酸钠混合液作为主液，每1000ml乳酸钠混合液含有50万单位青霉素、50万单位链霉素和体积百分比为10%的犊牛血清。