[发明专利]一种贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，属于中药质量检测技术领域。

背景技术

贞芪制剂有补气养阴、扶正固本之功效。现代药理实验证明能提高人体免疫功能，保护骨髓和肾上腺皮质功能，促进干扰素产生；配合肿瘤患者放、化疗，减轻病人放、化疗期间的毒副作用，促进正常功能的恢复的作用。其处方由黄芪、女贞子组成。目前，贞芪制剂供临床选择的剂型有片剂、胶囊剂、颗粒剂及滴丸剂等。

而黄芪中的主要有效成分为皂苷和黄酮类化合物，研究证实黄芪中的黄酮类成分具有多种药理活性、可以清除氧自由基、抑制脂质过氧化和维持血中NO浓度，保护缺血再灌注损伤。因此，黄芪黄酮类成分是贞芪扶正制剂的主要药物有效成分之一，而毛蕊异黄酮苷是黄芪黄酮类成分中重要的一种，对毛蕊异黄酮苷的含量进行测定也显得尤为重要。

但是，现有的贞芪扶正制剂的质量检测方法并没有对毛蕊异黄酮苷成分的含量进行测定，为进一步完善贞芪扶正制剂的质量检测标准，以确保其药品质量，建立贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定项目非常必要。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，该方法专属性强、精密度高、重复性好、回收率高、稳定性高、测量结果准确，达到了有效控制药物质量的目的，确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。

本发明所述的贞芪扶正制剂包括现有技术中的任意贞芪扶正制剂产品（颗粒、胶囊、片剂等），例如按照发明专利200310122216.7、200610051146.4所述的方法制备得到的制剂。

为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，它是以毛蕊异黄酮苷对照品为对照，以甲醇:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=30～70:70～30或者乙腈:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=20～50:80～50为流动相的高效液相色谱法。

具体的含量测定方法为：照高效液相色谱法、按下述步骤进行测定：

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=30～70:70～30或者乙腈:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=20～50:80～50为流动相（乙腈较甲醇的优点更明显，如产生鬼峰少；压力小等）；柱温为20～40℃；检测波长为215～275nm；流速为0.5～1.5mL·min^-1；理论板数按毛蕊异黄酮苷峰计算应不低于3000；

（2）对照品溶液的制备：精密称取毛蕊异黄酮苷对照品适量，加甲醇制成0.1mg/mL的溶液，备用；

（3）供试品溶液的制备：采用下述方法①-⑤中的任一种：

①精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取30～60min，待冷却后，用甲醇补足重量；过滤，取续滤液，即得；

②精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，用适量石油醚索氏提取30min，残渣挥干后，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取30～60min，待冷却后，用甲醇补足重量；过滤，取续滤液，即得；

③精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入70%～80%的乙醇100mL，称定重量，超声提取lh，用乙醇补足重量，滤过；精密量取续滤液50mL，减压浓缩至干，残渣加适量水使溶解，上大孔吸附树脂柱，静置吸附30min，依次用水、40%乙醇、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩至干，用甲醇溶解并转移至50mL的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

④精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取1h，用甲醇补足重量，滤过；精密量取续滤液50mL，浓缩至干，残留物用0.3%氢氧化钠溶液溶解后，加稀盐酸调至pH5～6，然后用乙酸乙酯或水饱和的正丁醇萃取四次，合并有机层，减压蒸干，残渣用甲醇定容至50mL，摇匀，即得；