[发明专利]一种贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法

权利要求书

1.一种贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，其特征在于：它是以毛蕊异黄酮苷对照品为对照，以甲醇:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=30～70:70～30或者乙腈:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=20～50:80～50为流动相的高效液相色谱法。

2.根据权利要求1所述的贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，其特征在于，照高效液相色谱法、按下述步骤进行测定：

（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=30～70:70～30或者乙腈:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=20～50:80～50为流动相；柱温为20～40℃；检测波长为215～275nm；流速为0.5～1.5mL·min^-1；理论板数按毛蕊异黄酮苷峰计算应不低于3000；

（2）对照品溶液的制备：精密称取毛蕊异黄酮苷对照品适量，加甲醇制成0.1mg/mL的溶液，备用；

（3）供试品溶液的制备：采用下述方法①-⑤中的任一种：

①精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取30～60min，待冷却后，用甲醇补足重量；过滤，取续滤液，即得；

②精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，用适量石油醚索氏提取30min，残渣挥干后，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取30～60min，待冷却后，用甲醇补足重量；过滤，取续滤液，即得；

③精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入70%～80%的乙醇100mL，称定重量，超声提取lh，用乙醇补足重量，滤过；精密量取续滤液50mL，减压浓缩至干，残渣加适量水使溶解，上大孔吸附树脂柱，静置吸附30min，依次用水、40%乙醇、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩至干，用甲醇溶解并转移至50mL的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

④精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取1h，用甲醇补足重量，滤过；精密量取续滤液50mL，浓缩至干，残留物用0.3%氢氧化钠溶液溶解后，加稀盐酸调至pH5～6，然后用乙酸乙酯或水饱和的正丁醇萃取四次，合并有机层，减压蒸干，残渣用甲醇定容至50mL，摇匀，即得；

⑤精密称取贞芪扶正制剂或其内容物2.0g，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声或回流提取1h，用甲醇补足重量，滤过；精密量取续滤液50mL，浓缩至干，残渣加适量温水溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，充分提取后，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水10mL使溶解，通过大孔吸附树脂柱，以水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.根据权利要求1或2所述的贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，其特征在于：所述的流动相为乙腈:0.2%甲酸水溶液=20:80。

4.根据权利要求2所述的贞芪扶正制剂中毛蕊异黄酮苷的含量测定方法，其特征在于：步骤（1）中的检测波长为260nm；流速为0.8～1.0mL/min；柱温为35℃。