[发明专利]一种稳定的蛋白质载药微粒系统制备方法

说明书

技术领域

本发明公开一种稳定的蛋白质载药微粒系统制备方法，可用于体内递送药物至病灶部位而发挥药效，属于生物制药技术领域。

背景技术

蛋白质载药微粒系统用于递送药物是目前研究大热点，通过体内相容性好蛋白质递送药物至病灶部位，靶向至病灶缓慢释放，可以延长药物半衰期和降低药物毒性，从而可以提高疗效，降低药物毒性。

蛋白质微粒作为研究热点，有众多报道蛋白质微粒制备方法，包括热交联、化学交联、乳化法等。这些制备方法中典型代表为乳化高压均质法，2005年上市紫杉醇白蛋白纳米粒（abraxane）是成功的代表，开创蛋白质微粒系统临床治疗的先河。Abraxane采用乳化高压均质法技术（美国专利US6749868，US5560933），将白蛋白溶液、 紫杉醇的乙醇溶液和三氯甲烷混合形成乳液，然后使用高压均质机进行制粒，接着高温去除有机溶剂后再水化，即可制备出紫杉醇白蛋白纳米粒。该制备方法复杂，使用高压均质和高温等条件，容易造成蛋白质变性，失去生物活性，也增大了成本，其次使用到三氯甲烷等毒性大溶剂，这无疑影响到产品安全性。

CN201010247885.7公开一种制备用于体内递送药理活性物质的蛋白纳米粒的方法，利用蛋白质在55-75℃左右打开蛋白质疏水性区域，而利用蛋白质二硫键打开再折叠自组装方法将药物包埋蛋白纳米粒中。但该方法需要在高温55-75℃左右反应，致使很多药理活性物质无法耐受高温，比如紫杉醇在高温下其7-表紫杉醇杂质会线性增大，从而影响产品的质量。

在现行制备方法中，基本都是根据蛋白质变性原理，采用高温、高压、化学变性物质固化蛋白，实现蛋白质微粒系统的制备。然而无论是高压、高温、化学变性剂都使得产品质量存在未知不安全因素。要么对蛋白质活性有损失，要么影响药物和产品质量，均存在一定缺陷。

发明内容

本发明提供一种稳定的蛋白质载药微粒系统制备方法，解决上述蛋白质微粒制备时高温、高压或化学变性剂等缺陷，可在低温、常压和无化学变性剂的条件下利用桥梁剂溶液方法制备成蛋白质载药微粒系统，进一步保障蛋白质活性和蛋白质载药微粒系统的产品质量。同时应用这种制剂系统递送药物至体内而发挥药效。本发明制备工艺简单，适合产业化。

本发明提供一种稳定的蛋白质载药微粒系统制备方法，其利用桥梁剂将含药物的有机相和含蛋白质的水相溶液混合成均相溶液；来实现蛋白质载药微粒系统的制备，其具体步骤如下：

1）用有机溶剂溶解药物，形成含药有机相； 

2）将蛋白质溶于水或缓冲体系中制备成10~500mg/ml的蛋白质的水相溶液；

3）在步骤1）中加入1%~饱和的桥梁剂溶液混匀，然后将2）中蛋白质水相溶液加入,混匀成均相溶液；

4）在0~80℃条件下，将步骤3）中形成均相溶液直接冷冻干燥制备成冻干粉针，采用5%葡萄糖或生理盐水等配伍稀释，即形成稳定的蛋白质载药微粒系统；

或将步骤3）中均相溶液直接使用水或5%葡萄糖、生理盐水、缓冲盐体系进行稀释，形成稳定的蛋白质载药微粒系统；

所述桥梁剂为盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐，碳酸盐中任意一种。

本发明所述的桥梁剂优选氯化钠，硫酸铵，氯化钾，硫酸钠，硫酸镁，磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，碳酸钠。

本发明核心技术为通过桥梁剂将含药物有机相与蛋白质水相溶液混匀成均相溶液来制备蛋白质载药微粒系统，其所述的桥梁剂为盐酸盐，硫酸盐，磷酸盐，碳酸盐。优选氯化钠，硫酸铵，氯化钾，硫酸钠，硫酸镁，磷酸钠，磷酸钾，磷酸二氢钠，碳酸钠。更优选氯化钠。

本发明的制备方法中步骤1）所述有机溶剂为醇类，酮类，酰胺类或亚砜类，优选乙醇、叔丁醇、丙酮、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜。

本技术方案制备方法中步骤2）所述蛋白质为白蛋白，血红蛋白，肌红蛋白，溶菌酶，免疫球蛋白，转铁蛋白，球蛋白，胶原蛋白。优选为人血白蛋白。

本技术方案所述在于步骤4）所述稀释的倍数为1~500倍，优选为10-50倍。

本发明提供一种稳定蛋白质载药微粒系统制备方法，其特征在于：所述包载药物为抗肿瘤药物，优选紫杉醇，多烯紫杉醇，卡巴他赛，阿霉素，替西罗莫司，西罗莫司，丝裂霉素，罗米地辛，SN38，顺铂及其衍生物，伊立替康、拓扑替康、埃博霉素，伊沙匹龙，硼替佐米。更优选为紫杉醇。

本发明所述蛋白质稳定微粒系统的平均粒径为10nm~10μm，优选为50nm~500nm，最优选为50nm~250nm。