[发明专利]一种小菜蛾抗菌肽defensin及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种小菜蛾抗菌肽defensin及其制备方法与应用。 

背景技术

抗菌肽(antibacterial peptide)是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽，存在于多种生物体中，是宿主免疫防御系统的一个重要组成部分(Boman and Hultmark, 1987; Bulet et al., 2004)。抗菌肽可作用于革兰氏阴性菌(G^-)、革兰氏阳性菌(G⁺)、真菌、寄生虫、癌细胞甚至是包膜病毒，而绝大多数抗菌肽对哺乳动物正常细胞无害，并且其杀菌机制与传统抗生素完全不同，被学者们认为是一种天然抗生素而备受青睐。随着研究的不断深入，越来越显示出了其在人类医学、兽医学等领域的独特应用价值(Boulanger et al., 2006; Bulet et al., 2004)。 

生物在病原体侵染时，自身会产生一系列的拮抗物质，以阻止病害的传播和病原微生物的进一步侵染，这种系统被称为防御系统。编码这些拮抗物质的基因统称为防御基因。防御素（defensin）是近年来发现的广泛存在于植物、昆虫、两栖类、鸟类和哺乳动物体内的一类富含半胱氨酸的天然广谱抗菌小分子多肽 (Tecle et al., 2010)。防御素通常由 29~54 个氨基酸组成，其中包括 6～8 个保守半胱氨酸，可通过半胱氨酸分子间二硫键使肽环形成反向平行的β片状结构，或含有一个α螺旋结构 (Tecle et al., 2010; 余兴邦 等， 2006)。防御素分子结构稳定且具有广谱的抗菌活性。根据分子结构特征和来源的不同，动物防御素可分为α-防御素、β-防御素和θ-防御素3 种。除此之外，还有昆虫防御素和植物防御素。防御素是一种富含半胱氨酸的小分子多肽，对细菌等微生物具有广谱抗性，且作用机制特殊。昆虫防御素是 1989 年由法国学者 Hoffmann 等人首先分离得到，它与兔子肺吞噬细胞防御素分子同源(Hoffmann and Hetru, 1992)。昆虫防御素大量存在于昆虫血淋巴液中，至今已在昆虫纲动物体内发现了数十种防御素和抗菌肽。成熟的昆虫防御素一般含有34～43个氨基酸，其分子链中在Cys3与Cys4 之间有3个保守的Gly残基。此外，其分子内的 3 对二硫键配对也与 α-和β-防御素不同，分别为 Cysl--Cys4、Cys2--Cys5、Cys3--Cys6。研究表明，昆虫防御素能够抵抗细菌的感染，但仅对抗革兰氏阳性菌表现抗性，对革兰氏阴性菌几乎无作用；昆虫防御素对真核细胞无作用，而且也未见昆虫防御素抗病毒感染的报道(付蓝宝等，2011)。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种小菜蛾defensin基因。 

本发明另一目的在于提供一种小菜蛾defensin蛋白。 

本发明另一目的在于提供一种小菜蛾defensin成熟肽蛋白的制备方法。 

本发明另一目的在于提供一种小菜蛾defensin和其成熟肽的应用，所述应用为用于制备抑制或杀死苏云金芽孢杆菌制剂。 

本发明的目的通过下述技术方案予以实现： 

    一种小菜蛾抗菌肽defensin基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示。

    一种小菜蛾抗菌肽defensin，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。 

    一种小菜蛾抗菌肽defensin的成熟肽，成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；成熟肽对应核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。 

一对扩增小菜蛾抗菌肽defensin的引物，引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13～14所示。 

    一种重组表达载体，由出发载体的多克隆位点插入如上所述小菜蛾抗菌肽defensin基因序列（如SEQ ID NO：1～2所示）或其成熟肽对应核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。 

优选地，所述重组表达载体为pMTA-PxDef 。 

一种重组细胞系，是由如上所述的重组表达载体转入S2细胞中所得。