[发明专利]一种小菜蛾抗菌肽defensin及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种小菜蛾抗菌肽defensin基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示。

2.一种小菜蛾抗菌肽defensin，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

3.一种小菜蛾抗菌肽defensin的成熟肽，其特征在于，成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；成熟肽对应核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

4.一对扩增小菜蛾抗菌肽defensin的引物，其特征在于，引物序列如SEQ ID NO：13～14所示。

5.一种重组表达载体，其特征在于，由出发载体的多克隆位点插入权利要求1所述小菜蛾抗菌肽defensin的核苷酸序列或权利要求3所述小菜蛾抗菌肽defensin的成熟肽序列。

6.根据权利要求5所述重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pMTA-PxDef 。

7.一种重组细胞系，其特征在于，是由权利要求5或6所述的重组表达载体转入S2细胞中所得。

8.一种小菜蛾抗菌肽defensin的成熟肽的制备方法，其特征在于，具体方法为向权利要求7所述的重组细胞系中加入终浓度为250 mM的硫酸铜，连续收集10天诱导24小时后培养基上清，将收集的培养基上清混合在一起，离心，收集上清，除去细胞碎片，首先用平衡buffer平衡Anti-V5 凝胶珠，其次与收集的上清进行充分的温育，然后将Anti-V5凝胶珠混合液加入柱子中，流速为0.05 ml/min，将所有收集的无细胞培养基通过柱子流过几次后，用平衡buffer洗脱柱子，洗脱到测定蛋白浓度A280接近零时，换成洗脱buffer 洗脱目的蛋白，在收集蛋白时，预先在收集蛋白的管中加入100 μL 1 M Tris-base（ pH 8.0 ）收集流出液，利用15% SDS-PAGE电泳分析蛋白的纯度和浓度，最后将收集的蛋白进行脱盐，利用超纯水对脱盐柱Excellulose GF-5进行平衡，然后将收集的蛋白加入到柱子中去，收集流出的蛋白，即为成熟肽。

9.权利要求1所述小菜蛾抗菌肽defensin的应用，其特征在于，用于制备抑制或杀死苏云金芽孢杆菌的制剂。

10.权利要求3所述小菜蛾抗菌肽defensin的成熟肽的应用，其特征在于，用于制备抑制或杀死苏云金芽孢杆菌的制剂。