[发明专利]一种精确估算终点法试剂空白吸光度的方法

说明书

技术领域

本发明属于检验医学技术领域，具体涉及一种精确估算终点法试剂空白吸光度的方法。

背景技术

目前，由于科技的发展和个人、家庭、乡村医院、野外等各方面的迫切需要，便携式医疗设备(POCT，Point of Care Test)已成为医疗设备发展的主要趋势之一。在检验医学领域，微流控技术与试剂冻干技术的结合，更是实现了在微流控芯片上实现微量全血的离心分离、定量、传输和几个甚至几十个生化指标的同时检测。且此类设备体积小、成本低、操作简单、结果即时可得，已成为检验医学领域便携式检验设备的最主要发展趋势。

常规的生化检测终点法测试中，在样品没有加入反应杯之前，首先测量反应杯中试剂空白的吸光度A1，再加入样品，一定时间之后再次测量反应结束后的吸光度A2，通过这两次测量的光强值可以计算出样品的浓度C=a*(A2-A1)，其中a为给定的摩尔吸收系数。而在POCT仪器中，为了简化操作步骤，降低人为因素对测量结果的影响，将生化试剂冻干并封装于微流控芯片的比色杯中，微量全血经离心分离后，血清与缓冲液混合进入封装有冻干试剂的比色杯内将冻干试剂复溶并反应，通过比色法计算样品浓度。此过程中无法直接测试试剂空白，因此，一种能对试剂空白的精确估算的方法对于便携式检验医学设备具有非常重大的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的问题，提供一种精确估算终点法试剂空白吸光度的方法。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

在具体实施步骤之前，本发明首先提出一种反应终点混合液等效组成方法：

首先，认为反应结束的混合液的吸光度                                                由剩余试剂吸光度、生成物吸光度、样品残余物吸光度组成，。

然后，认为剩余试剂吸光度为试剂空白吸光度减去反应消耗的试剂吸光度，。

接着，认为生成物和反应消耗的试剂都与待测样品的浓度成正比，即。设定一综合吸光度并令其为，、、为单位浓度对应的吸光度。

进一步的，以样品空白吸光度近似代替残余物吸光度。

最终，得到反应终点混合液吸光度可等效为三部分组成，即：

为样品浓度。

基于此等效，本发明提出一种精确估算终点法试剂空白吸光度的方法，该方法需同时测试反应杯、样品空白杯主次波长处结束吸光度，次波长选择在处；具体估算步骤如下：

步骤1）使用两相同比色杯同时进行测试，其中一个放置样品与试剂，另一个放置样品空白，同时测得反应结束主、次波长处吸光度、和样品空白的主、次波长处的吸光度、； 

步骤2）忽略，初步估算试剂空白在次波长处的吸光度，进而估算试剂空白在主波长处的吸光度为，为试剂空白在主次波长处的吸光度比例系数，定值 ，可事先测定；

步骤3）由朗伯-比尔定律，根据估算的试剂空白，预估算样品浓度，为计算浓度时的相关系数，定值，由试剂说明书给出；

步骤4）由浓度、综合吸光度和样品空白，通过从终点吸光度中扣除综合吸光度和样品吸光度，精确估算试剂空白在主波长处的吸光度。

进一步的，所述步骤（1）-（4）在测定待测样品之前，需测定以下参数：

（1）测定单位浓度的综合吸光度谱线：使用浓度已知无杂物的标准品测试，比色杯同前。通过直接测量试剂空白和终点吸光度，得到单位浓度综合吸光度为

；

（2）测定纯试剂空白的吸光度谱线；选择主、次波长、，通过直接测试试剂空白在主次波长处的吸光度计算系数。

进一步的，所述步骤（1）需选择主次两个波长同时进行测试，并将次波长选择在综合吸光度的处。

进一步的，在所述步骤（2）中，试剂空白在主次波长处的吸光度比例系数为定值，并由此通过次波长处的吸光度计算主波长处的吸光度。 

进一步的，其特征在于，在所述步骤（3）中，由终点吸光度扣除样品吸光度、预估试剂空白吸光度，得到吸光度变化并计算样品浓度。

进一步的，在所述步骤（4）中，通过在结束吸光度中扣除综合吸光度、样品吸光度，得到试剂空白吸光度。

本发明的有益效果: 

采用本发明技术方案，无需实际测试试剂空白，原理清晰明了，计算结果准确可靠，估算误差小于1%，特别适用于无法直接测试试剂空白的仪器。

附图说明