[发明专利]一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法

权利要求书

1.一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于包括下列步骤：

A.血液分离：取动物新鲜血液，加入质量浓度为5～13％的柠檬酸钠溶液，柠檬酸钠溶液的体积为血液体积的5～10％，经抗凝处理后经连续流离心机离心收集红细胞，泵入水解反应罐；

B.溶血破碎细胞：向步骤A收集的红细胞中加入1～3倍体积的纯净水，使红细胞完全破碎，得红细胞溶血液；

C.热变性：将红细胞溶血液加热至60℃保温10～30分钟后，再向红细胞溶血液中加入用以提高溶液的离子强度的碱金属盐，至碱金属盐浓度为0.1～0.6mol/L，继续加热至65℃，保温20～60分钟后，再升温至70～75℃，保温15至20分钟，立即放料冷却；

D.压滤：用800目滤布对经步骤C处理的红细胞溶血液进行机械压滤，滤液为SOD粗提液；

E.超滤浓缩：SOD粗提液先经超滤膜预处理拦截分子量大于100万的大分子蛋白和细胞膜碎片，然后经截留分子量8000孔径的超滤膜反复超滤，去除水分、无机盐和小分子杂蛋白，直至浓缩到SOD粗提液体积的2％～12％，即为SOD浓缩液；

F.沉淀除杂蛋白：向步骤E所得的SOD浓缩液中加入金属盐，至该金属盐浓度为1～5mmol/L，搅拌均匀后静置沉淀，离心去沉淀，上清液经超滤脱盐后获得SOD粗品。

2.如权利要求1所述的从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：在步骤F中，获得的SOD粗品经离子交换层析后再经分子筛层析后获得SOD精品。

3.根据权利要求1或2所述的从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：在步骤C中，所述的碱金属盐为碱金属的氯化物中的一种或几种的混合物。

4.如权利要求1或2所述的从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：在步骤F中，所述的金属盐为铜盐或锌盐中的一种或几种的混合物。

5.如权利要求1或2所述的从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：在步骤B中采用高压匀浆使红细胞完全破碎或采用搅拌机搅拌使红细胞完全破碎。

6.如权利要求2所述的从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：离子交换层析是DEAE阴离子交换层析，所用的层析填充料为DEAE-Sepharose FF。

7.如权利要求2所述的从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：分子筛层析填充料是Sephadex G-100或Sephadex G-75，层析柱先用纯净水平衡，然后上样，以纯净水洗脱，收集SOD活力峰。