[发明专利]一种厌氧增菌培养基及其配制方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种厌氧增菌培养基及其配制方法。

背景技术

厌氧菌引起的菌血症近年呈上升趋势且造成的死亡率较高。20世纪70年代血培养厌氧菌分离率高达20%～30%, 其中脆弱拟杆菌群占78%, 在革兰阴性菌中仅次于大肠埃希菌占第二。近年厌氧菌耐药性的出现使经验治疗面临挑战，厌氧菌引起的临床感染及临床后果重新受到重视。厌氧血培养是为临床提供快速、准确诊断厌氧菌血症的金标准方法。

对厌氧菌血症回顾性研究表明，厌氧菌血症因诊断错误导致的死亡率可高达55%～63%，但在明确病原菌后采用针对性治疗，死亡率可降至14%～17%。因此，厌氧血培养结果对临床治疗的指导作用显而易见，漏检血培养中的厌氧菌将导致严重后果。准确、及时的厌氧血培养结果对针对性抗菌治疗即为重要，厌氧增菌培养基的质量决定了血培养的厌氧菌的阳性检出率和检出时间。由于厌氧菌对环境条件的要求苛刻，生长速度慢，实验室报告结果时间较长，不能对临床及时指导。

发明内容

为解决上述现有技术的不足，本发明提供一种厌氧增菌培养基，该培养基能促进临床标本中厌氧细菌的繁殖，提高厌氧病原菌的阳性检出率。

按照本发明的厌氧增菌培养基，其包含：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1.5-4.0份，脑心浸液肉汤0.5-1.5份，葡萄糖0.6-2.5份，硫代乙醇酸钠2.5-4.0份，氯化血红素0.003-0.008份，维生素K₁为0.0003-0.0008 份，抗凝剂0.3-0.5份，厌氧指示剂0.00005- 0.0003份，蒸馏水900-1100份。

上述方案中优选的是，还包含含量为 0.05-0.15份的L-半胱氨酸或维生素C。

上述任一方案中优选的是，还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢铵中的任一种或几种混合物，含量为0.3-0.6份。

上述任一方案中优选的是，蛋白胨25份，酵母浸粉2份，脑心浸液肉汤1份，葡萄糖2份，硫代乙醇酸钠3份，氯化血红素0.005份，维生素K₁为0.0005 份，抗凝剂0.35份，厌氧指示剂0.0001份，蒸馏水1000份。

上述任一方案中优选的是，还包含含量为0.1份的L-半胱氨酸或维生素C。

上述任一方案中优选的是，还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙和碳酸氢铵中的任一种或几种混合物，含量为0.4份。

上述任一方案中优选的是，所述蛋白胨为多价胨，所述多价胨是胰化酪蛋白和胃蛋白的等重量混合蛋白胨。

上述任一方案中优选的是，所述蛋白胨为胰蛋白胨、大豆蛋白胨等中的任一种或几种的混合。

上述任一方案中优选的是，所述抗凝剂为聚茴香脑磺酸钠、对氨基苯甲酸、硫酸镁、吸附抗生素复合树脂等中的任一种或几种混合。

上述任一方案中优选的是，所述厌氧指示剂为刃天青和/或亚甲基蓝（美兰）。

上述厌氧增菌培养基的配置方法，包括以下步骤：

（1）准备原料：蛋白胨20-28份，酵母浸粉1.5-4.0份，脑心浸液肉汤0.5-1.5份，葡萄糖0.6-2.5份，硫代乙醇酸钠2.5-4.0份，氯化血红素0.003-0.008份，抗凝剂0.3-0.5份，厌氧指示剂0.00005- 0.0003份；

（2）将步骤（1）中的原料放入烧杯中，加入蒸馏水900-1100份，搅拌混均，调节pH值6.8-7.0；然后加热煮沸，以驱逐液体中的氧气；

（3）将步骤（2）中煮沸后的培养基转移到充有氮气的厌氧瓶或厌氧管中，此过程应避免引入氧气；转移完成后，还应继续通入氮气10-20秒；然后封闭厌氧瓶或厌氧管，使其避免进入氧气；

（4）将步骤（3）中装有培养基的厌氧瓶或厌氧管进行灭菌处理；

（5）在步骤（4）中灭菌后的培养基中加入0.0003-0.0008 份的维生素K1，该培养基即可使用。 

上述方案中优选的是，步骤（1）中的原料还包含含量为0.05-0.15份的L-半胱氨酸或维生素。

上述方案中优选的是，步骤（1）中的原料还包含碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙、碳酸氢铵中的任一种或几种混合物，含量为0.3-0.6份。

上述方案中优选的是，步骤（2）中所述调节pH值是使用1mol/L的NaOH溶液进行调整。

上述方案中优选的是，步骤（2）中所述煮沸时间为8-13分钟。

上述方案中优选的是，所述煮沸时间为10分钟。