[发明专利]一种采用高效液相色谱法测定苯甲酰腈样品含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及样品中苯甲酰腈含量的测定，尤其涉及一种采用高效液相色谱法测定苯甲酰腈样品含量的方法。

背景技术

苯甲酰腈是一种重要的有机合成中间体，其衍生物是合成医药产品胃长宁、农药除草剂苯嗪草酮等的重要中间体。苯甲酰腈，分子式为C₈H₅NO，化学结构为：已知苯甲酰腈的合成多大是以苯甲酰氯和液体氰化钠(或氰化亚铜)为原料，在催化剂作用于一定反应条件下来合成苯甲酰腈产物。例如：CN1047282A在无水介质中用酰氯与碱金属氰化物制备酰基氰；CN1047280A含氧化单元的物质在少量水存在下与催化剂合成酰基氰。

在相关文献报道中，张涛的《苯甲酰腈的气相色谱分析》中涉及到了苯甲酰腈含量测定。其采用苯乙腈为内标物，二甲苯为溶剂，但这两种物质毒性大，二甲苯挥发性强，不利于操作人员身体健康。在相关文献中，目前的检测方法主要有芳香族化合物的一些分析方法研究，例如：西南大学学报(自然科学版)，2010，32(1)：59-62，李艳艳等人采用HPLC法测定杜仲中绿原酸和芦丁；西南师范大学学报(自然科学版)，2007，32(2)：35-40，徐霞等人采用反相高效液相色谱法测定7种苯二氮类药物的研究；Journal of Chromatography A，2004，1040：209-214，Abe-Onishi Y等人采用高效液相色谱法分析面粉中过氧化二苯甲酰及苯甲酸的含量；Applied Entomology and Zoology，1994，29(4)：517-522，Mori N等人采用HPLC方法分析千足虫中苯甲醛、苯酚及苯甲氰醇的含量。这些方法仅仅针对其它物质的检测，具有一定的借鉴意义，但不能作为苯甲酰腈含量检测的关键。

因为酰氯和酰氰类物质，其羰基碳高度缺电子，可与含活泼氢如水、醇、胺等作用，而生成对应的酰基化物。如与大量水反应生成羧酸和氰氢酸或氯化氢；与醇发生醇解生成酯；与氨类物质生成酰胺等。且苯甲酰腈不易溶于水，易溶于醇、醚等有机溶剂，该物质的特殊性质，导致了在探索苯甲酰腈的液相色谱的分析方法上受到了很大的限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法测定苯甲酰腈样品含量的方法，该方法操作简单、快速、准确，其分析结果重现性好、精密度高，实用性强，可用于苯甲酰腈合成过程和终产品的质量控制。

本发明的目的是这样实现的：

一种采用高效液相色谱法测定苯甲酰腈样品含量的方法，其特征在于：其色谱柱选用十八烷基键合硅胶色谱柱，以水相-有机相为流动相进行等度洗脱，检测波长为190nm～350nm；所述水相选用为超纯水，所述有机相选用为乙腈。

已知酰基氰与亲核试剂水、醇、胺等在一定条件下发生酰化反应。然而，水、醇、胺类物质在十八烷基键合硅胶色谱柱上的应用通用而又广泛。因此，为了让苯甲酰腈在C18柱上既能很好分离又能避免苯甲酰腈酰基化，合适的流动性的选择也是苯甲酰腈在液相色谱上应用的重点。通过实验发现，当流动相为甲醇时，苯甲酰腈峰型对称性差，可能发生酰化反应，苯甲酰腈与杂质不能完全分离；当采用乙腈作为流动相时，样品液中的杂质峰与苯甲酰腈也不能很好分离；当选用体积比为85∶15的乙腈与水的混合溶液为流动相时，由一系列验证实验可证明，该流动相对样品液洗脱能力好，苯甲酰腈色谱峰无杂质干扰且苯甲酰腈色谱峰峰型对称，保留时间适中。因此，该流动相是按照体积比为水∶乙腈为15％∶85％组成的混合液。

上述十八烷基键合硅胶色谱柱的填料的颗粒度为3～5μm，优选为5μm；色谱柱柱长100～250mm，优选250mm。

上述检测波长，优选设置为272nm。将苯甲酰腈用乙腈配制一定浓度后，在二级管阵列下扫描，扫描后的数据在190～350nm下以1.5nm为步长，以波长(nm)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标绘制出苯甲酰腈紫外吸收波长光谱图，详见说明书附图3。从光谱图中可以看出，苯甲酰腈在199nm、215nm、272nm处有三个明显波峰。在199nm、215nm处于截止波长位置，而且大多数杂质在截止波长附近均有吸收，苯甲酰腈在272nm处有最大吸收，且杂质相应小，流动相无吸收，因此，选择272nm为检测波长。

为进一步保证检测结果的准确性，上述体积比为85∶15的乙腈与水的混合液作的流动相，使用前经0.45μm微孔过滤膜过滤后放入数控超声波清洗器中超声10～15min，充分脱出流动相中的气体。