[发明专利]犬细小病毒病毒样颗粒、其制备方法及应用

权利要求书

1.犬细小病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）根据昆虫细胞偏爱密码子对犬细小病毒VP2基因进行优化，得到优化的犬细小病毒VP2基因；

（2）重组杆状病毒Bacmid质粒的构建：将优化的VP2基因插入到昆虫细胞表达载体pFastBac1中，转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，提取阳性质粒即为重组杆状病毒Bacmid质粒；

（3）重组杆状病毒的拯救：用重组杆状病毒Bacmid质粒转染昆虫细胞，拯救获得重组杆状病毒；

（4）犬细小病毒病毒样颗粒的制备：将获得的重组杆状病毒按MOI=0.1接种昆虫细胞，4-5天后收获上清，即得犬细小病毒病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中优化的犬细小病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）-（4）中使用的昆虫细胞为Sf9细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（3）中待Sf9细胞的细胞汇合度达到80%以上时进行转染。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法制备的犬细小病毒病毒样颗粒。

6.权利要求5所述的犬细小病毒病毒样颗粒在制备犬细小病毒性肠炎疫苗中的应用。

7.犬细小病毒性肠炎疫苗，其特征在于，将权利要求5所述的犬细小病毒病毒样颗粒辅以防腐剂和佐剂制备而成。

8.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，所述防腐剂为叠氮钠，终浓度为0.01%。

9.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂为磷酸铝，终浓度为0.4%。

10.根据权利要求7所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗为肌肉注射疫苗或口服疫苗。