[发明专利]一株放线菌波卓链霉菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，特别涉及放线菌波卓链霉菌（Streptomyces bottropensis）菌株及其应用，具体涉及一株高产磷脂酶D的放线菌菌株及其应用。

背景技术

磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）又称丝氨酸磷脂或二酰甘油酰磷酸丝氨酸，是一种天然磷脂，1942年由Jordi Folch首次提取并命名。磷脂酰丝氨酸并非单一成分，而是一组化合物，这是由于不同来源的原料所提取的产品的脂乙酰残基的变化较大而造成。PS以甘油为主要骨架，1、2号碳原子上面连接脂肪酸，构成它的非极性尾部，3号碳原子连接一个带丝氨酸的磷脂，构成它的极性头部。

磷脂酰丝氨酸的制备方法比较多，其中主要以提取法和酶转化法为主。

提取法主要是从植物细胞、动物的脑和肝脏中提取的。由于植物中的PS含量较少，所以提取法以动物组织中提取为主。从动物中提取主要是动物的大脑及内脏，目前国外大部分以牛、羊、兔、马、驴等家畜的动物脑为原料来提取PS。磷脂酰丝氨酸存在于组织的脂类物质里，要想得到纯净的磷脂酰丝氨酸，首先要把粗磷脂从组织中进行浓缩分离，然后再通过TLC法、硅胶柱色谱法、氨基键合硅胶柱色谱法、高效液相色谱法等方法对粗磷脂再进一步分离纯化。粗脂质的提取方法目前最常用的主要有氯仿-甲醇-水提取法、己烷-异丙醇提取法等。近年来由于疯牛病的原因，利用动物大脑提取PS的方法获得的产品安全性受到人们的怀疑，此种方法现在已处于淘汰边缘。

酶转化法主要以天然的卵磷脂为基质，加入丝氨酸，在磷脂酶D的作用下，生成磷脂酰丝氨酸。应用此种方法不但可以填补国内生产磷脂酰丝氨酸合成酶制剂的空白，还可以解决药物、保健品开发对高品质磷脂及其衍生物的迫切要求，对于发展高品质磷脂及其衍生物制备技术，支持国内关键药物技术—脂质体靶向给药技术开发，提高人民健康水平具有重要的现实意义。

磷脂酰丝氨酸(PS)可由人体利用丝氨酸合成产生，它可影响脑内化学讯息的传递，并帮助脑细胞储存和读取资料，是维持大脑正常记忆力、反应和健康情绪的重要营养元素。其药理作用表现在以下5方面：①改善记忆力、延缓脑疲劳，治疗老年痴呆症。②治疗儿童多动症。③缓解精神压力。④治疗抑郁症。⑤竞技运动营养。

目前大规模生产磷脂酰丝氨酸的重要性不仅仅在于其生物学及工业化应用潜力, 同时也与其在保健、营养方面的逐渐应用有关。然而从自然界分离提取磷脂酰丝氨酸以及化学合成法生产过程都是十分复杂的, 而且化学法合成也仅限于实验室规模。因此，有待于开发一种工艺简单，方便的方法来实现磷脂酰丝氨酸的工业化。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种放线菌菌株，该菌株能够高产磷脂酶D，进而生物转化法制备高产磷脂酰丝氨酸，本发明还提供了该菌株制备磷脂酰丝氨酸的方法。 

本发明通过如下技术方案实现：

本发明提供的新的微生物菌株为波卓链霉菌（Streptomyces bottropensis）6632。

本发明菌株在不同培养基上的基本特征如下：

 

菌落形态：参见图1

菌丝形态：参见图2

生理生化特征：

以分子生物学手段，提取上述菌株的16s rDNA，以Primer(S)、Primer(A)（Primer(S)：5’AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG  3’ ； Primer(A)：5’AAG GAG GTG ATC CAG CCG CA  3’ ）为引物进行PCR扩增，测序，并将所测序列与Genbank中的16s rDNA同源序列比对，选取14株较高同源性的菌株，利用软件Clustal X与Mega4.0构建菌种进化树。菌株SYP-A-6632 与波卓链霉菌（Streptomyces bottropensis）同源性为99%，再结合形态学鉴定结果，该菌株被鉴定为波卓链霉菌（Streptomyces bottropensis），该菌具有高产磷脂酶D的功能，其分泌产生的磷脂酶D能够催化磷脂酰胆碱和L-丝氨酸进行转酯反应，生成磷脂酰丝氨酸。参见图3。

本发明的高产磷脂酶D的放线菌菌株的快速筛选方法，按以下步骤进行：

(1)  菌株的活化

用竹签将筛选出的高产菌株从原始斜面接种到新鲜高氏一号固体斜面培养基，于20~32℃培养箱中静置培养3~14d；

(2) 摇瓶种子的制备