[发明专利]一种鉴定落叶松枝条生根能力的方法

权利要求书

1.一种用于鉴定落叶松枝条生根能力的特异性引物，其特征在于它由引物序列SEQ NO.1: 5’ CTGCTTAGGGGTGGCCTGTC 3’和SEQ NO.2: 5’ CTGCTTAGGGAGAACCATGGATGTG  3’组成。

2.一种用于鉴定落叶松枝条生根能力的PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒由PCR引物、dNTP、缓冲液和DNA聚合酶组成，其成分如下：

PCR引物：SEQ NO.1 和SEQ NO.2各50μL （浓度为10 μM/L）；

10 mM dNTP                    50μL；

10×酶特异性反应缓冲液   500μL；

5 U/μl 耐热DNA聚合酶   200μL；

阳性对照品                         15μL，

阴性对照品                        15μL；

ddH₂O                               10mL；DNA聚合酶为Taq聚合酶。

3.一种采用权利要求2所述的试剂盒鉴定落叶松无性繁殖材料生根能力的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）提取落叶松基因组DNA；

（2）基因组DNA的0.8%琼脂糖凝胶电泳检测；

（3）特异引物PCR扩增，在PCR扩增专用的离心管中加入： PCR缓冲溶液、dNTP、引物序列对5’CTGCTTAGGGGTGGCCTGTC3’和5’CTGCTTAGGGAGAACCATGGATGTG 3’、落叶松基因组DNA、Taq聚合酶、无菌水补至25μL，将装有上述液体的PCR专用薄壁离心管放入PCR扩增仪中，扩增条件为：94℃变性2 min，后进入降式PCR：94℃ 30 s,65℃ 1 min,72℃ 1min10 s，的扩增循环，循环环数为10，每个循环温度降低1℃，随后94℃ 30 s,55℃ 1 min,72℃ 1min10 s ，共25个循环；最后在72℃延伸5 min，扩增完成；

（4）PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测：配置1.5%的琼脂糖凝胶，在凝胶中加入0.5μg/mL溴化乙锭；在5μL扩增产物中及标准阳性Marker中分别加入1μL 6×上样缓冲液，混匀，用移液器将上述混合液分别加入浸没TBE电泳液的琼脂糖凝胶的点样孔中，120V恒电压，电泳10 min后停止电泳，凝胶直接在紫外波长265nm的紫外灯下或在凝胶成像仪上进行观察；

（5）结果判读：依照标准阳性Marker带在凝胶上的迁移位置和PCR产物的迁移位置判断落叶松根系生长情况。

4.权利要求2所述PCR试剂盒在制备检测落叶松无性繁殖材料生根能力方面的应用。