[发明专利]一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法

权利要求书

1.一种核酸序列5’ CCTCCTTCCTCCCTACGTGCT3’， 其特征为： 由合成纳米银簇序列（5’CCTCCTTCCTCC3’）和与HIF有相互作用的识别序列（5’CTACGTGCT3）组成双功能核酸（DNA）， 质谱验证序列为5’ CCTCCTTCCTCCCTACGTGCT3’。

2.一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

以5’ CCTCCTTCCTCCCTACGTGCT3’序列为模板，在柠檬酸钠缓冲溶液中，加入由合成纳米银簇序列5’CCTCCTTCCTCC3’和与HIF有相互作用的识别序列5’CTACGTGCT3组成双功能DNA，序列为 5’ CCTCCTTCCTCCCTACGTGCT3’和AgNO3混匀后放置到水浴中，20-68℃ 加热 0.5-2 min， 最佳 1min，后缓慢降温到室温 1-2 h, 最佳1h；加入NaBH₄溶液将DNA-Ag⁺还原成DNA-Ag, 转移到4℃环境中避光放置 1-4天， 最佳3天，即可得到稳定的荧光探针。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于其中所述的柠檬酸钠缓冲溶液的pH 5.0-6.0, 浓度为10-20 mM。

4.根据权利要求2所述的一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于其中所述的双功能DNA与Ag⁺的摩尔比为1:10 -1:20。

5.根据权利要求2所述的一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于其中所述的NaBH₄与Ag⁺的摩尔比：1:2- 4:1。

6.根据权利要求2所述的一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于其中所述的柠檬酸钠缓冲溶液的pH5.0, 浓度为10 mM。

7.根据权利要求2所述的一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于其中所述的双功能DNA与Ag⁺的摩尔比1:15。

8.根据权利要求2所述的一种用于检测缺氧诱导因子的荧光纳米核酸银的制备方法，其特征在于其中所述的NaBH₄与Ag⁺的摩尔比为1:1。

9.权利要求2 制备的荧光纳米核酸银在HIF 检测中的运用，可用于定性分析细胞全蛋白中HIF的含量，并可用于区分HIF高表达的肿瘤细胞和正常细胞。