[发明专利]巨桉组培苗的培育方法

说明书

技术领域

本发明属于植物栽培领域，具体涉及一种巨桉组培苗的培育方法。

背景技术

巨桉(Ellcalyplus grandis Hill ex Maid)原产于澳大利亚，为高大乔木，具有速生、丰产、抗盐碱、耐寒等特点，是用材林、沿海防护林、生态林建设的主要树种之一，近年在我国南方各省已建有一定规模的短轮伐期工业用材林基地，现在随着西部大开发及长江、珠江防护林工程的实施，退耕还林的进展加快，巨桉种植面积逐步扩大，其种苗供应市场前景广阔。巨桉种苗的繁殖多采用组织培养的方法，且技术成熟。

目前，白炽灯是组织培养的主要光源，但白炽灯能耗高，寿命短，含汞，易造成环境污染，且光质单一，不能满足植物在组培不同生长阶段对光质的需求差异。发光二级管(LED)是一种能发光的半导体电子原件，通过化学修饰方法，调整材料的能带结构和禁带宽度，可实现红黄绿蓝橙多色发光，满足植物在组培不同阶段对光质的需求差异，同时，LED消耗能量较同效的白炽灯减少80％，无有害金属汞，使用寿命可达10万小时，《国家基本公共服务体系“十二五”规划》指出要大力支持发展LED产业，在规划期间LED灯将大量替代传统日光灯在各行各业广泛推广应用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种既能满足巨桉叶片组培不同阶段对光质的需求差异，又能提高愈伤组织诱导率、不定芽分化率及有效苗得率的LED组培光源调控方法。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明一方面涉及一种巨桉组培苗的培育方法，包括以巨桉组培苗叶片为外植体，对巨桉叶片进行愈伤组织诱导，对叶片愈伤组织进行不定芽分化培养以及进行生根培养的操作步骤，其特征在于在红光和蓝光照射条件下对巨桉叶片进行愈伤组织诱导；在红光或蓝光照射条件下对叶片愈伤组织进行不定芽分化培养；在绿光照射条件进行不定芽生长培养，再转移到LED黄光下进行生根培养。

在本发明的一个优选实施方式中，所述红光的光谱波长为620～760nm，所述蓝光的光谱波长为435～492nm，所述黄光的光谱波长为520～650nm。

在本发明的另一个优选实施方式中，采用红光和蓝光共同照射条件下对巨桉叶片进行愈伤组织诱导，优选的，所述红光和蓝光的强度比为70-80∶30-20。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的光源部分或者全部采用LED光源。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的光量均在90-120μmol·m^-2·s^-1左右，光周期为14-18h·d^-1，优选的，培养室相对湿度70％±5％，温度(24±1)℃。

本发明的组培光调控方法能有效地提高巨桉叶片的愈伤组织诱导率、不定芽分化率及有效苗得率，而且能有效缩短出苗时间，此外，本发明耗能低，平均成本增加少。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

选择成熟种子于50～55℃温水浸泡后自然冷却，4～6h后无菌水冲洗2次，20％(体积比)NaClO消毒15min，无菌水冲洗3～4次，接种于1/2MS培养基上。

取上述组培苗叶片(叶宽0.5～1cm)为外植体，在叶片上剪3～4道伤口，且深达主脉。将处理好的叶片接入WPM+6-BA1mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1培养基中，暗培养5d后放置7个不同光质LED光源下培养诱导愈伤，每个光下放9个规格为90*15mm的培养皿，每个培养皿中接种12片叶。调节LED灯控软件以及光源和植株的距离，使光量均在105μmol·m^-2·s^-1左右，光周期为16h·d^-1，培养40天。培养室相对湿度70％±5％，温度(24±1)℃。

其中，光源为购自杭州汉徽光电科技有限公司的LED灯。具体技术参数见表1。

表1不同光质LED光源的主要技术参数

接种后每日观察巨桉叶片在上述7种光源下的生长情况。第10天，RB2处理下的巨桉叶片最先出现愈伤，之后3天内RB1、R处理、B处理下的叶片依次出现愈伤，而其余处理下的叶片出现愈伤在15天后。40天后，对每个光处理下的巨桉叶片愈伤组织出愈率和褐化率进行统计，结果见表2。

表2不同光质下愈伤组织培养情况