[发明专利]一种草莓高效脱毒组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种草莓的高效脱毒组培方法。

背景技术

草莓属多年生草本植物，栽培生产中主要靠匍匐茎进行营养繁殖，经多年种植后，由于感染多种病毒，致使品质和产量降低，经济效益明显下降。目前草莓脱毒组培苗已在农业生产中广泛应用。它对于降低生产成本、提高草莓产品的品质、提高农民经济收入具有举足轻重的作用。利用组培快繁技术可对草莓脱毒苗进行快速繁殖及推广，出苗整齐，可进行周年生产，不受季节限制，实现新品种的工厂化育苗并迅速推广。

现有的研究中，多采用的外植体为：腋芽、茎尖、叶片、叶柄、根、花药、花瓣、托叶、子房等，虽然都获得了成功，但均存在各种各样的缺陷。例如以茎尖为外植体培养，主要存在脱毒率低和繁殖系数低的问题；而以叶片、叶柄、根、花药、花瓣、托叶、子房等为外植体，虽然脱毒率和繁殖系数有较大的提高，但存在变异较大的问题，不能很好的保持原有品种的种性。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种繁殖系数高的草莓组织培养方法，其具体的技术方案是：

一种草莓高效脱毒组培方法，是以草莓匍匐茎顶端的微茎尖为外植体进行组织培养，得到草莓植株。

本发明的方法，所述草莓匍匐茎顶端的微茎尖是将包裹在茎尖分生组织外侧的叶片去除，得到的不带叶原基的微茎尖。

本发明的方法，包括以下步骤：

（1）将所述外植体置于诱导微茎尖萌发培养基上培养，诱导微茎尖萌发，得到萌发的幼苗；

（2）将幼苗接到增殖培养基上培养，增殖出丛生芽；

（3）将上述步骤（2）得到的丛生芽转接到生根培养基上培养，诱导生根，得到完整再生植株。

本发明的方法，采用诱导培养基、增殖培养基、生根培养基依次有目的性培养，可以提高草莓的生长速度，各步骤的培养时间一般为：步骤（1）的培养时间是20天，步骤（2）的培养时间是30天，步骤（3）的培养时间是30天。经步骤（3）生根培养后得到的草莓植株苗高5-10cm，具有3-5条粗根，5-10条细根；培养周期从18周缩短为12周。

本发明的方法，各个步骤中的培养基主要是提供草莓各阶段生长必须的营养物质，经试验发现，各步骤的培养基成分优选如下：

步骤（1）中，所述诱导微茎尖萌发培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的半固体培养基；其中6-BA的终浓度是0.1-2.0mg/L，NAA的终浓度是0.01-0.1mg/L；其中6-BA的终浓度优选是0.3mg/L，NAA的终浓度优选是0.01mg/L。

步骤（2）中，所述增殖培养基是在MS基本培养液中添加6-BA、NAA、碳源和凝胶剂得到的半固体培养基；其中6-BA的终浓度是0.1-2.0mg/L，NAA的终浓度是0.01-0.1mg/L；其中6-BA的终浓度优选是0.5mg/L，NAA的终浓度优选是0.03mg/L。

步骤（3）中，所述生根培养基是在1/2MS基本培养液中添加IBA、碳源和凝胶剂得到的半固体培养基；其中IBA的终浓度是0.02mg/L。

所述各步骤的培养基中的凝胶剂是琼脂、卡拉胶或Gelrite，优选为琼脂，在培养基中的终浓度为7-8g/L；碳源是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖，优选为蔗糖，在培养基中的终浓度为30g/L。

本发明的方法，所述各步骤中的培养条件为：培养温度：25±2℃；采用LED光源在培养过程中进行光照，光照时间：12-16h/d；光强：2000-3000LX。其中所述LED光源优选采用红、蓝、白光的混合光照，其中红、蓝、白光之间的比例为：5-7:1-3:8-10；最优选比例为：7:2:10。

本发明采用草莓微茎尖脱毒组培，脱毒率高，选择最优的LED光照配比和培养基激素配比，减少培养周期，以进行高效脱毒组培。微茎尖萌发率均达95%以上，生根率达到98%以上。本发明以微茎尖为基础进行快速繁殖，不仅繁殖系数较高，而且很好的保持的原有品种的特性，尤其在新优草莓品种植株的短期扩繁，草莓种质库保存植株的快繁具有广阔的应用前景；另外，还可以作为一种新的转基因途径加以运用。

具体实施方式

为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：

实施例1：

（一）配制培养基：

一、MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

表1.MS基本培养液的溶质