[发明专利]一种HIV-1多表位DNA疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种核苷酸序列及其作为DNA疫苗的应用，属于分子生物学和免疫学领域。

背景技术

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)。自1981年世界报道首例艾滋病(AIDS)病例以来，短短30年间，艾滋病迅速在全球范围内蔓延扩散，成为当今全球最大的健康危机，也是影响我国公众健康的重要公共卫生问题。近年来，艾滋病感染在我国出现新的流行态势，即发病率逐年增加，感染对象覆盖不同人群，性传播比例增多，尤其是男-男同性恋病人上升显著，变异重组病毒在流行分离株中所占比例增多。如何有效防治HIV感染，降低发病率和病死率是我国面临的紧迫任务。疫苗是控制HIV感染的有效手段，在近30多年的研究工作中，HIV疫苗研发方面也取得了一些重要的进展。一种能够同时诱导体液和细胞免疫的HIV疫苗RV144的临床III期试验表明，该疫苗能够在一定程度上降低HIV的感染，从而降低艾滋病的发生。RV144疫苗采用了金丝雀重组痘病毒初免，重组蛋白疫苗加免的策略，初免的重组金丝雀痘病毒疫苗是一种以金丝雀痘病毒为载体的、表达HIV-1包膜蛋白(Envelope，EnV)gp120和HIV-1B gag蛋白及蛋白酶的重组病毒疫苗，加免的重组蛋白疫苗是HIV-1B/E gp120亚单位疫苗，其III期临床试验结果显示出31.25%的保护效率。但是目前仍然缺乏能够应用于人群的有效疫苗。

我国HIV-1感染形势不容乐观。截止到2012年10月，我国累计报告HIV-1感染者及病人总数达492191人，2012年前十个月新增发病人数及死亡人数与2011年同期相比均呈现增长趋势，且局部地区感染情况尤为严重。一种有效的HIV疫苗应该能诱导针对不同流行株、适用于不同人群，我国流行的HIV病毒与其它国家和地区不同，人群MHC限制性不同。目前还缺乏对我国HIV流行株和中国主要HLA亚型的疫苗，本发明的目的在于提供一种能针对中国多种HIV流行株适用于中国大多数人群MHC限制性的HIV多表位疫苗。

发明内容

本发明利用生物信息学方法，分析、筛选获得了HIV不同分离株和中国人大多数人群MHC限制性的保守表位；将各个表位依照不同的顺序，以不同的“linker”连接，获得包含12个保守性表位的多表位氨基酸序列，然后利用生物信息学方法，预测分析不同序列的免疫原性，基于提供HIV多表位DNA疫苗的发明目的，本发明首先提供了一种核苷酸序列，所述核苷酸序列编码氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示的多肽。

为使之适于在哺乳动物细胞内表达，通过密码子优化，在本发明的一个优选的技术方案中，所述核苷酸序列如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供了一种含有如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列的真核表达质粒。

在一个优选的技术方案中，所述表达质粒为pJW4303-YY1。

在另一个优选的技术方案中，所述表达质粒为pJW4303-YY2。

所述表达质粒可以在COS-7细胞中有效表达。

本发明提供的含有重组DNA的pJW4303-YY1和pJW4303-YY2免疫小鼠后，可以诱导机体产生针对多种表位的特异性抗体和细胞免疫，因此，本发明还提供了上述质粒在制备DNA疫苗中的应用。

本发明还提供了一种药物制剂，所述制剂含有pJW4303-YY1或pJW4303-YY2及制药学上可接受的助剂。所述助剂可以是缓冲液、防腐剂、赋形剂、分散剂、助溶剂、增溶剂、表面活性剂等。

在一个优选的技术方案中，所述制剂为注射制剂。