[发明专利]冬虫夏草的HPLC特征图谱及其建立方法和应用

权利要求书

1.一种冬虫夏草的HPLC特征图谱，其中，所述HPLC特征图谱包括5个特征峰，以5号峰腺苷峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为：

1号峰：相对保留时间0.12±0.0012，相对标准偏差为0.14%；

2号峰：相对保留时间0.36±0.0036，相对标准偏差为0.28%；

3号峰：相对保留时间0.61±0.0061，相对标准偏差为0.34%；

4号峰：相对保留时间0.63±0.0063，相对标准偏差为0.22%；

5号峰：相对保留时间1.00，相对标准偏差为0.17%。

2.一种用于检测含冬虫夏草的药物制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

1）使用HPLC法得到待检测药物制剂的HPLC特征图谱；并使用腺苷峰为参照峰，计算各色谱峰的相对保留时间；

2）将步骤1）得到的相对保留时间与权利要求1所述的冬虫夏草HPLC特征图谱中特征峰相对保留时间比较；

3）将步骤1）得到的时间与蛹虫草HPLC特征图谱的特征峰相对保留时间比较；优选地，所述蛹虫材药材HPLC特征图谱包括6个特征峰，以峰d所代表的腺苷峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间和相对标准偏差为：

峰a：相对保留时间0.11±0.0011，相对标准偏差为0.11%;

峰b：相对保留时间0.36±0.0036，相对标准偏差为0.28%；

峰c：相对保留时间0.63±0.0063，相对标准偏差为0.22%;

峰d：相对保留时间1.00，相对标准偏差为0.17%;

峰e：相对保留时间1.14±0.0114，相对标准偏差为0.06%；

峰f：相对保留时间1.26±0.0126，相对标准偏差为0.01%；

4）根据步骤2）和步骤3）的比较结果判断所述冬虫夏草的药物制剂中是否含有冬虫夏草，使用蛹虫草代替冬虫夏草或者为冬虫夏草与蛹虫草的混合物。

3.如权利要求1或2所述的冬虫夏草HPLC特征图谱或蛹虫草HPLC特征图谱的建立方法，该方法包括以下步骤：

（1）制备冬虫夏草溶液或蛹虫草溶液，以及腺苷对照品溶液；

（2）将步骤（1）所得冬虫夏草溶液或蛹虫草溶液，以及腺苷对照品溶液分别进行高效液相色谱分析，得到冬虫夏草或蛹虫草，以及腺苷的HPLC指纹图谱；

（3）通过比较不同冬虫夏草的HPLC特征图谱确定冬虫夏草的共有特征峰，或通过比较不同蛹虫草的HPLC特征图谱确定蛹虫草的共有特征峰。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述制备冬虫夏草或蛹虫草溶液的方法包括如下步骤：精密称取冬虫夏草或蛹虫草，精密加入水加热回流，取上清液，用微孔滤膜滤过即得；所述制备腺苷对照品溶液的方法包括如下步骤：精密称取腺苷对照品，加入甲醇溶解定容，取续滤液即得。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述高效液相色谱分析的条件包括：采用反相填料色谱柱；检测波长为200～400nm，流速0.1～5ml/min，柱温0～60℃，进样量1～100μl，流动相为甲醇-水梯度洗脱液。

6.如权利要求3-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述高效液相色谱分析的条件包括：采用岛津WondaSil C185μm×250mm×4.6mm色谱柱；检测波长为260nm，流速1.0ml/min，柱温35℃，分析时间45min，进样量10μl，流动相为甲醇-水梯度洗脱液；

优选地，所述甲醇-水梯度洗脱的洗脱条件包括：0～5min的洗脱液中甲醇体积百分含量保持2%，5～30min的洗脱液中甲醇体积百分含量为2%～15%，30～35min的洗脱液中甲醇体积百分含量为15%～95%，35～40min的洗脱液中甲醇体积百分含量保持95%，40～41min的洗脱液中甲醇体积百分含量为95%～2%，41～45min的洗脱液中甲醇体积百分含量保持2%。

7.如权利要求3-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述冬虫夏草或蛹虫草的共有特征峰的确定方法为，采用药典委员会规定的HPLC指纹图谱计算软件A版，通过比较不同冬虫夏草的HPLC特征图谱从而确定冬虫夏草的共有特征峰，或通过比较不同蛹虫草的HPLC特征图谱从而确定蛹虫草的共有特征峰。