[发明专利]脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法

权利要求书

1.一种脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于包含如下步骤：利用中低压色谱系统对脂肪酸单酰化胰岛素进行分离，使用有机聚合物反相色谱材料为固定相，洗脱的流动相为含有至少一种能与水混溶的有机溶剂和至少一种缓冲剂物质、pH值为2～4。

2.根据权利要求1所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的脂肪酸单酰化胰岛素是在母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在B链上存在的Lys残基的ε-氨基处连接了侧链的天然存在的长链脂肪酸或者其类似物，该侧链具有如下一般通式：

-X-Y；

其中X为与母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或者与母体胰岛素B链Lys残基的ε-氨基之间的共价键；

X为：-CO-；

Y为：-(CH₂)m-，其中m为6～32的整数；

而其中母体胰岛素选自人胰岛素、des（B1）人胰岛素、des（B30）人胰岛素、Gly^A21人胰岛素、Gly^A21des（B30）人胰岛素、Asp^B28人胰岛素、猪胰岛素、Lys^B28Pro^B29人胰岛素、Gly^A21Arg^B31Arg^B32人胰岛素或Lys^B3Glu^B29人胰岛素。

3.根据权利要求2所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的脂肪酸单酰化胰岛素为（N^εB29-十四烷酰）Lys^B29des（B30）人胰岛素、（N^εB29-十四烷酰）Lys^B29人胰岛素或（N^εB29-十六烷酰）Lys^B29des（B30）人胰岛素。

4.根据权利要求1所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的中低压色谱系统是工作压力为2～25巴的色谱系统。

5.根据权利要求1所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的有机聚合物反相色谱材料为聚甲基丙烯酸酯或是聚苯乙烯-二乙烯基苯。

6.根据权利要求5所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的有机聚合物反相色谱材料的平均粒度为5～300μm。

7.根据权利要求6所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的有机聚合物反相色谱材料为MCI GEL CHP、Source15、Source30、CG161、CG300、CG1000和Uni PS中的一种或至少两种。

8.根据权利要求1所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的能与水混溶的有机溶剂为乙腈、酮或碳原子数为C1～C4的醇。

9.根据权利要求1所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的缓冲剂物质为磷酸盐、醋酸盐或柠檬酸盐。

10.根据权利要求1所述的脂肪酸单酰化胰岛素的色谱纯化方法，其特征在于：所述的pH值为3.0～3.5。