[发明专利]miRNA-132化合物在制备慢性疼痛诊断标志物及治疗药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种微小RNA分子的新用途, 尤其涉及miRNA-132的新用途，属于生物医学技术领域。

背景技术

微小RNA(miRNA)是新近发现的一类在转录后水平调控基因表达的18～22 bp单链RNA小分子。miRNA参与细胞分化、凋亡和代谢等多种生物学过程，这一调节进程异常可引起多种疾病发生。慢性疼痛是当今危害人类健康和降低人们生活质量的最常见临床病症之一，已成为临床和基础科学研究的热点问题。中枢神经元(如脊髓、背根和三叉神经)是调控慢性疼痛发生的重要部位，这些部位神经元可塑性改变导致中枢敏化是慢性疼痛形成的关键。miRNA在神经中枢中表达极为丰富，但对于其功能研究尚处于起步阶段。Miska等利用Northern印迹方法对特定组织器官表达的miRNA进行了研究时发现7个miRNA在人脑中有特异表达，这些miRNA分别是miRNA-9，miRNA-124a, miRNA-135，miRNA-153，miRNA-183和miRNA-219。Arai M等发现miRNA-132在大鼠脊髓损伤的海马中发生明显的差异表达。中国专利201010520926.5公开了miRNA-132化合物与妊娠期糖尿病相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用； 201110372354.5公开了“miR-132在制备治疗帕金森病药物中的应用”，但目前还没有进一步的功能行为学试验阐释通过miRNA调控慢性疼痛机制的研究。关于miRNA-132作为一种抑制慢性疼痛基因的用途和作为慢性疼痛诊断标志物的用途目前也尚未见报道。  

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中治疗慢性疼痛药物的不足，通过对miRNA深入研究，在miRNA-132原有用途的基础上，通过大量实验筛选，开发出miRNA-132新用途。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

本发明提供miRNA-132在制备慢性疼痛疾病临床诊断标志物中的应用。

本发明另一个目的是提供miRNA-132化合物在制备治疗慢性疼痛药物中的应用。

本发明所述的miRNA-132化合物的核苷酸序列如序列表1，该核苷酸序列与中国专利201110372354.5公开的miR-132核苷酸序列SEQ ID NO.16相同，即本发明所述的miRNA-132（miR-132）和中国专利201110372354.5公开的miR-132具有相同的核苷酸序列（uaacagucua cagccauggu cg）为同一个化合物。

    本发明首先采用筛选方法对多个神经组织特异表达miRNA进行了检测，实验结果表明miRNA-132在完全弗氏佐剂（CFA）慢性疼痛小鼠脊髓中出现明显下调表达，表明miRNA-132表达下调和慢性疼痛的直接相关性，因此通过miRNA-132化合物过表达可以抑制疼痛。

本发明采用原位杂交实验结果表明miRNA-132在小鼠脊髓中的出现明显表达，采用慢病毒介导的过表达技术检测到，当CFA慢性疼痛小鼠脊髓miRNA-132过表达时，其疼痛域值明显上升；而在正常小鼠miRNA-132下调表达时，小鼠疼痛域值明显降低，表明miRNA-132化合物可提高疼痛阈值上升，发挥很好的抑制慢性疼痛功效。

   另外，本发明对miRNA-132在慢性疼痛病人血液中的表达进行了定量检测。研究证实miRNA-132在慢性疼痛病人中表达水平均出现显著下调，也表明本发明所述的miRNA-132可以作为慢性疼痛的诊断标志物，同时也可以作为防治慢性疼痛的药物。

   有益效果：本发明通过大量实验研究筛选，实验结果表明miRNA-132在慢性疼痛发生和维持过程中的重要调控作用，作为疼痛抑制基因，miRNA-132能显著抑制慢性疼痛的发生，可作为制备防治慢性疼痛的药物，同时也可作为慢性疼痛疾病临床诊断标志物。并且本发明研究结果表明通过检测或干涉神经中枢中miRNA-132 的表达可为慢性疼痛预防诊断或治疗方案。

附图说明

图1是 miRNA-132在CFA慢性疼痛小鼠模型中的差异表达。

图2是小鼠脊髓中miRNA-132探针原位杂交检测结果。

图3是 miRNA-132CFA慢性疼痛小鼠中过表达(A)和在正常小鼠中下调表达(B)的疼痛行为学结果。

具体实施方式