[发明专利]一种制备专一性T细胞的配方、方法及其配方制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及制备专一性T细胞的配方、方法及配方制备方法，尤其涉及一种利用呈现专一性抗原的树突状杀手细胞群活化T细胞，制备专一性T细胞的配方、方法及配方制备方法。

背景技术

人体对外来异物具有辨识和启动一连串反应的防御机转，这防御系统就是免疫系统。免疫系统拥有不同作用的白血球及淋巴细胞、不同功能的蛋白质因子，如免疫球蛋白、介白质及细胞激素等，互相协调合作，形成人体的防御力。免疫反应依其特异性及记忆性的有无，分为先天性及后天性。先天性免疫系统包括可溶性化学因子、干扰素、补体系统、嗜中性淋巴球及巨噬细胞的吞噬作用和自然杀手细胞的毒杀作用等。后天性免疫系统包括体液免疫及细胞免疫，前者包括抗体生成系统，后者包括淋巴细胞、淋巴激素及免疫记忆系统。记忆的功能使免疫系统对已对付过的抗原，引发强而快速的次发反应，可将外来危害因子有效去除。

免疫反应对抗原会有不同反应是由于主要组织兼容复合物（Major Histocompatibility Complex,MHC）的作用。外来抗原通常需要经过细胞处理与MHC分子结合后，才能被免疫系统所认知。因此MHC的类型与个人对特定因子的免疫力有关，是造成个体对疾病易感性的重要因素。人类的MHC又名人类白血球抗原（Human Leukocyte Antigen,HLA）。HLA可分为class I、class II，为结构相似的醣蛋白，与抗原呈现功能有关。HLA class I抗原表现于所有体细胞上，而class II只表现于巨噬细胞、B细胞及树突状细胞（Dendritic Cell,DC）的细胞表面上。

人体内有一种高度分化的免疫细胞，叫做抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells,APC）。抗原呈现细胞的功能是摄取、加工、处理外源性抗原并将加工后抗原呈现给T淋巴细胞，诱导T淋巴细胞进行增殖进而分化成效应细胞，产生免疫反应，以辨识并抵抗感染甚至癌症细胞。树突细胞（Dendritic cells，DCs）是目前所知的人体内功能最强大的抗原呈现细胞，因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。DC的最大特点是能够显著刺激初始T细胞进行增殖，而其他的抗原呈现细胞，如巨噬细胞、B细胞仅能刺激已活化的或记忆性T细胞。因此DC是机体免疫反应的始动者，在免疫反应的诱导中具有独特的地位。

另外，自然杀手细胞（Natural Killer cell,NK cell）也是一种在免疫反应中占有重要地位的细胞，其起源于淋巴前驱细胞，占人类血液中淋巴球的5～10％。NK细胞表面缺乏专一性的抗原受体，负责非专一性防御，可以胞杀肿瘤细胞和被病毒感染细胞。NK细胞表面虽然没有抗原专一性受体，但其表面有许多其他的膜蛋白接受来自目标细胞的刺激，以调节NK细胞的活性，这些膜蛋白大致可分为“抑制性受体”和“活化性受体”。当NK细胞与细胞接触后，获得活化性受体的讯息，若与正常细胞接触，则正常细胞表面的第一型MHC分子与抑制性受体结合，传递了“抑制”NK细胞活性的讯息，故NK细胞不会被活化，以避免杀死正常细胞。若正常细胞被病毒感染或转为肿瘤细胞后，第一型MHC分子的表现常会发生异常，因此当NK细胞接触不正常细胞时，便无法获得抑制性受体的讯息，于是NK细胞便活化进行胞杀作用。也就是说，只有“活化”讯息存在，且“抑制”的讯息异常或不存在时，NK细胞才会进行胞杀作用。

近年来，同时具有上述两种DC与NK细胞功能的干扰素分泌型杀手树突细胞逐渐受到关注。干扰素分泌型杀手树突细胞可以从毒杀目标、抗原呈现到活化T细胞都由自己完成，也即干扰素分泌型杀手树突细胞找到目标后会毒杀目标，接着把碎片吞噬后呈现抗原给T细胞，并活化T细胞。然而，正如同前文述及，干扰素分泌型杀手树突细胞虽然在免疫反应中扮演了相当重要的角色，但因为干扰素分泌型杀手树突细胞在体内的量非常稀少，如此低的细胞比率及数目，需要繁琐的步骤来加以纯化，也限制了针对干扰素分泌型杀手树突细胞的进一步研究。不仅如此，目前的技术仅能从老鼠的脾脏、淋巴结或骨髓中分离出干扰素分泌型杀手树突细胞，使得要实际将其应用于研究或临床上都面临了不小的瓶颈。

因此，发明人经过长年的努力以及无数次的试验，已成功筛选出了人类体内同时具有毒杀及抗原呈现功能的细胞，并定义该细胞为树突状杀手细胞（Dendritic Killer Cell,DKC），又称为毒杀型树突细胞(cytoDC)或干扰素分泌型杀手树突细胞(IKDC)。