[发明专利]一种高效液相色谱法测定硫酸奎宁片中硫酸奎宁的含量

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体要求保护一种测定硫酸奎宁片中硫酸奎宁含量的高效液相色谱法。

背景技术

硫酸奎宁，是喹啉类衍生物(结构见附图1)，能与疟原虫的DNA结合，形成复合物抑制DNA的复制和RNA的转录，从而抑制原虫的蛋白合成，作用较氯喹为弱。适用于氯喹和耐多种药物虫株所致的恶性疟。

硫酸奎宁片是硫酸奎宁与淀粉等辅料均匀混合后压制而成的圆片状制剂，外有糖衣包被。中国药典2010版关于硫酸奎宁片的含量控制方法为高氯酸滴定法，此法受温度影响比较大，滴定终点颜色变化由人为判定，受人为因素影响比较大，不同操作者操作存在较大误差，检测结果重现性低。本发明公开了一种高效液相色谱法测定硫酸奎宁片中硫酸奎宁含量，操作简单，精密度高，重现性好，对于硫酸奎宁片的质量控制具有重要的实用价值。

发明内容

本发明目的是建立硫酸奎宁片质量控制的方法，硫酸奎宁片中硫酸奎宁的含量使用高效液相色谱法进行测定和控制。具体通过以下技术方法实施：

色谱条件：

色谱柱选用十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱。

流动相为磷酸缓冲液与乙腈的混合溶液。硫酸奎宁是喹啉类衍生物，流动相加入磷酸缓冲液的成分，可以提高检测灵敏度，硫酸奎宁水溶液PH在5.7～6.6范围内，流动相用磷酸溶液调PH至4.0左右，易于硫酸奎宁的洗脱和分离。其中磷酸缓冲液配制方法为：称取6.8g磷酸二氢钾，用1000ml水溶解，磷酸调PH至4.0。

流动相中乙腈与磷酸缓冲液比例优化实验中，乙腈体积比为10％～45％，其中优选10％，乙腈体积比为45％～15％时，主峰与杂质峰的分离比均小于1.5，不符合中国药典分离度的标准，乙腈体积比为10％，主峰与杂质峰分离度为6.15，主峰与杂质分离效果很好。

检测器使用DAD检测器，确定硫酸奎宁在190nm～260nm有较好的紫外吸收，最大吸收波长为250nm，此波长下硫酸奎宁的相关物质也有较好的吸收，检测波长优选250nm。硫酸奎宁紫外吸收图谱见附图2.

流速为1ml/min，进样体积5μl。

溶液配制：

硫酸奎宁标准品溶液：分别精密称定20～50mg标准品，置于25ml容量瓶，加一定量的流动相超声15min将样品溶解，再用流动相定容至刻度线。

硫酸奎宁片溶液：取本品，除去包衣，研细，精密称定适量(约相当于硫酸奎宁40mg)，置于25ml容量瓶，加一定量的流动相超声15min将样品溶解，再用流动相定容至刻度线。

定量分析法：

本发明用外标法对硫酸奎宁片中硫酸奎宁含量进行标定，分别在0.4mg/ml～2mg/ml范围内选择5个样品浓度制定校正曲线，供试品溶液所得峰面积代入校正曲线计算，即得供试品溶液中硫酸奎宁含量。

附图说明

图1为硫酸奎宁结构式。

图2为硫酸奎宁紫外吸收图谱。

图3为硫酸奎宁250nm波长下的图谱。

图4为硫酸奎宁标准曲线。

具体实施方式

实施例1

试剂与样品：色谱乙腈(默克)，磷酸二氢钾(AR)，磷酸(AR)，超纯水，武汉远大购硫酸奎宁片(国药准字H42021750)。

仪器与设备：Agilent-1260高效液相色谱仪，上海声彦数字超声波清洗仪，0.2μm有机系过滤装置，0.45μm滤头等。

色谱条件：流动相：乙腈∶磷酸缓冲液(10∶90)，其中磷酸缓冲液配制方法为：称取6.8g磷酸二氢钾，用1000ml水溶解，磷酸调PH至4.0。流动相经0.2μm过滤器过滤2次，超声脱气15min后使用。

溶液配制：硫酸奎宁标准品溶液-分别精密称定9.8mg，21.3mg，31.6mg，41.3mg，50.6mg标准品，分别置于25ml容量瓶，加一定量的流动相超声15min将样品溶解，再用流动相定容至刻度线，配制成硫酸奎宁的标准品溶液。硫酸奎宁片溶液-取本品，除去包衣，研细，精密称定适量(约相当于硫酸奎宁40mg)，置于25ml容量瓶，加一定量的流动相超声15min将样品溶解，再用流动相定容至刻度线。

定量分析法：将配制的标准品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，所得标准品峰面积绘制成校正曲线，供试品溶液峰面积代入计算，3次测得远大购硫酸奎宁片平均含量为98.36％，RSD值为1.0％，测定结果稳定可靠。

实施例2