[发明专利]基于切刻内切酶恒温扩增技术的ATP或NAD的系统及检测方法无效
| 申请号： | 201310228082.0 | 申请日： | 2013-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN103276096A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 马昌杯;夏昆;陈汉春;何海伦 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/25 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 切刻内切酶 恒温 扩增 技术 atp nad 系统 检测 方法 | ||
1.基于切刻内切酶恒温扩增技术的ATP或NAD的系统，其特征在于，该系统由尾部一端带有荧光标记、另一端带有荧光标记或者荧光熄灭基团的分子信标核酸探针，与分子信标环部配对的两个核酸片段、DNA或RNA核酸连接酶、以及切刻内切酶在缓冲溶液中组成。
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，检测ATP的体系配制如下：在含有66mM pH8.0的Tris-HCl、6.6mM MgCl2和10mM DTT的100μL反应缓冲液中加入300nM分子信标5'-(TAMRA)–CCTCTC TGA GTG CAT TCC AGT ACG GAGAGG-(DABCYL)-3'、1.4U的T4DNA连接酶，4U的Nb.Bsm I切刻内切酶,200nM核酸片段5'-ATG CAC TC-3'和200nM另一核酸片段5'-CGT ACT GGA-3'；
检测NAD的体系配制如下：在含有30mM pH8.0Tris-HCl、2.5mM CaCl2、5mM DTT、10mM MgCl2、1.2mM EDTA和0.05﹪BSA的100μL反应缓冲液中加入300nM分子信标5'-(TAMRA)–CCTCTC TGA GTG CAT TCC AGT ACG GAGAGG-(DABCYL)-3'、6.0U的E.coli DNA连接酶，4U的Nb.Bsm I切刻内切酶，200nM核酸片段5'-ATG CAC TC-3'和200nM另一核酸片段5'-CGT ACT GGA-3'。
3.采用权利要求1或2所述的系统检测ATP或NAD的方法，其特征在于：
将缓冲体系在37℃温育，同时监测荧光强度，待荧光稳定后加入ATP或NAD样品，观察并记录荧光强度的变化。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，荧光检测所用波长根据分子信标修饰的荧光染料来选择，激发波长为338-560nm,发射波长为500-660nm。
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