[发明专利]用于皮肤感染性肉芽肿常见病原体检测的探针与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于皮肤感染性肉芽肿常见病原体检测的探针与试剂盒。 

背景技术

皮肤感染性肉芽肿病是一组主要由真菌、分枝杆菌、放线菌、奴卡菌和利什曼原虫等病原体所致的、组织病理呈肉芽肿样改变的疾病。在我国，真菌和分枝杆菌为首要致病菌，不仅可致皮肤及皮下组织感染，也可通过血行播散或直接浸润扩散导致危及生命的系统感染。各种真菌所致的着色芽生菌病、暗色丝孢霉病、孢子丝菌病等双相真菌感染在皮肤科临床日益多见；结核病在人类致死性感染性疾病中居首位，寻常狼疮等皮肤结核可致毁容，麻风病使人致畸、致残、丧失劳动能力，近年来国内外报道的非结核分枝杆菌感染也明显上升，有时尚出现爆发流行。 

随着恶性肿瘤、艾滋病、糖尿病、自身免疫病等导致机体抵抗力严重低下疾病的不断增多，器官移植、导管介入等技术的推广应用、广谱抗生素和免疫抑制剂的广泛使用甚至滥用等，真菌和分枝杆菌的机会感染率和危害性也大大增加，据统计在HIV感染病程中发生结核、非结核分枝杆菌或真菌感染的可能性为70-90％，是其主要的死亡原因之一，尤其是当艾滋病等免疫力低下的患者继发真菌或分枝杆菌感染时，其皮损和肉芽肿改变常为首先被发现的临床和病理征象，如不及时地确诊和正确处置，可造成严重局部组织破坏或全身播散感染。再者，临床上免疫正常者发生皮肤感染性肉芽肿类疾患的病例快速增加，且大多为皮肤外伤所致。我国体力劳动者群十分庞大，皮肤外伤感染所致的皮肤感染性肉芽肿患者为数众多。该类疾病临床表现的多形性和缺乏特异性，以及其组织病理的呈感染性肉芽肿改变的非鉴别性，导致临床诊断极为困难。 

在中国，对1980年以来报道的皮肤感染性肉芽肿病例分析总结，分枝杆菌中结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、非结核分枝杆菌(鸟分枝杆菌、细胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和偶遇分枝杆菌)；真菌中申克孢子丝菌、卡氏枝孢霉菌、 裴氏着色菌、Fonsecaea monophora为最常见的病原体；此外，白色念珠菌为最常见的深部真菌感染菌株，亦可致念珠菌性肉芽肿；细菌中星形奴卡菌、以色列放线菌及利什曼原虫有散发报道。 

目前国内对真菌、分枝杆菌等微生物所致皮肤感染的诊断主要通过镜检、培养和组织病理等传统技术，同时结合分子生物学技术一定程度可提高其敏感性、特异性。但上述检测过程繁琐分散。因此，研究和开发适用于早期、快速和简便、一式多元化的皮肤感染性肉芽肿致病菌对于实验室筛查、检测技术有重要临床价值和意义。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于皮肤感染性肉芽肿常见病原体检测的探针 

本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种用于皮肤感染性肉芽肿常见病原体检测的试剂盒。 

对于用于皮肤感染性肉芽肿常见病原体检测的探针，本发明采用的技术方案是：包括分枝杆菌16SrRNA DNA探针、真菌18SrRNA DNA至28SrRNA DNA间隔序列DNA探针、奴卡菌、放线菌、利什曼原虫DNA探针； 

分枝杆菌16SrRNA DNA探针包括分枝杆菌探针、结核分枝杆菌探针、麻风分枝杆菌探针、鸟分枝杆菌探针、细胞内分枝杆菌探针、堪萨斯分枝杆菌探针和偶遇分枝杆菌探针；分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，结核分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示，麻风分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.3所示，鸟分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.4所示，细胞内分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.5所示，堪萨斯分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.6所示，偶遇分枝杆菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.7所示； 

真菌18S rRNA至28s rRNA间隔序列DNA探针包括白色念珠菌探针、申克孢子丝菌探针、卡氏枝孢霉菌探针、裴氏着色菌探针、Fonsecaea monophora探针；白色念珠菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.8所示，申克孢子丝 菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.9所示，卡氏枝孢霉菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.10所示，裴氏着色菌探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.11所示，Fonsecaea monophora探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.12所示； 

奴卡菌DNA探针的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.13所示；