[发明专利]应用盐酸小檗碱分子印迹色谱柱分离盐酸小檗碱的方法

说明书

技术领域

本发明属于高效液相色谱法领域，特别是一种应用盐酸小檗碱分子印迹色谱柱分离盐酸小檗碱的方法。

背景技术

盐酸小檗碱，化学结构式：

，是天然药物黄连中主要成分小檗碱的盐酸盐，不仅具有清热燥湿、泻火解毒之功效，还有抗菌、降血糖、抗肿瘤和抗心律失常等药理活性，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。

分子印迹技术是将被分离检测的物质作为模板分子，将其固定在高交联度的聚合物中，除去模板分子后，留下与模板分子立体构型互补的空间结构，对模板分子具有高度的特异识别能力。目前，分子印迹聚合物在色谱中对映体和异构体的分离、药物分析、传感器、模拟酶、固相萃取和催化剂等领域应用广泛。

液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术，是色谱法中最古老的一种，但通过改进填料的粒度及柱压，在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论，在技术上采用了高压输液泵，高效固定相和高灵敏度的检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种色谱技术被称为高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，简称HPLC）。HPLC有以下特点：速度快—通常分析一个样品在15~30min，有些样品甚至在5min内即可完成从；分辨率高—可对差异性很小的物质对如手性物质进行分离分析；灵敏度高—紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg；柱子可反复使用，用一根色谱柱可分离不同的化合物；样品量少，容易回收；样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

目前，关于盐酸小檗碱高效液相色谱分离法的报道，我们查到如下一些文献：

1.申请号：200710017585.8，发明名称：一种治疗中老年眼部疾病中药制剂的质量检测方法，其中提到盐酸小檗碱含量测定，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以43∶57的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。

2.李建勋，张亮，王淑珍.HPLC法同时测定三黄片中盐酸小檗碱与黄岑苷的含量.中国药师.2005，8（6）：479-480；采用高效液相色谱法，用C₁₈色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），以甲醇-0.05mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-冰乙酸（40∶60∶1）为流动相，流速为1.0ml·min^-1，检测波长333nm。

    关于应用盐酸小檗碱分子印迹色谱柱分离盐酸小檗碱，到目前为止未见报道。

发明内容

本发明的目的在于解决上述存在的问题，提供一种应用盐酸小檗碱分子印迹色谱柱分离盐酸小檗碱的方法，该方法灵敏度高、操作简单，不会对药物和保健品造成二次污染。

为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种应用盐酸小檗碱分子印迹色谱柱分离盐酸小檗碱的方法，按照如下步骤进行：

（1）制备样品溶液：取适量样品，用有机溶剂溶解，配制成每1L含盐酸小檗碱1.0×10^-5-3.0×10^-4mol的样品溶液；所述样品为盐酸小檗碱与盐酸川芎嗪或延胡索乙素其中一种的混合物；

（2）设定参数：将盐酸小檗碱分子印迹色谱柱接入液相色谱仪，设置液相色谱仪的流动相流速为0.1-1mL/min，检测波长345nm，柱温箱30±10℃；

（3）分离：启动进样阀使流动相将样品溶液带入盐酸小檗碱分子印迹色谱柱中，实现盐酸小檗碱的分离。

作为进一步的说明，以上所述盐酸小檗碱分子印迹色谱柱，其装填料为盐酸小檗碱分子印迹聚合物；所述盐酸小檗碱分子印迹聚合物为球形多孔材料，其粒径为50~180μm，平均孔径为2~100nm。

作为进一步的说明，以上所述盐酸小檗碱分子印迹色谱柱，柱径与柱高比值为1∶1-300，柱内管径在1-100mm，柱高10-300mm。

作为进一步的说明，以上所述盐酸小檗碱分子印迹色谱柱，柱管两端外侧设有内螺纹与管路相连，两端内侧有设筛板防止固体填料外漏，但可以使液体通过。

作为进一步的说明，以上所述有机溶剂为甲醇。

作为进一步的说明，以上所述流动相为乙酸-甲醇混合溶液，所述乙酸和甲醇的体积比为0.01-1∶100。