[发明专利]红掌盆栽品种的离体组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及红掌盆栽品种外植体的离体组织培养方法。

背景技术

 红掌（Anthurium andraeanum）为天南星科花烛属多年生草本花卉，原产于南美洲热带雨林，喜高温和高湿的环境条件。红掌茎短缩、节上多气生根，株高50～80cm，叶聚生茎顶、革质，叶心形、椭圆形等。花与叶轮流生长，一片叶下抽出一枝花，佛焰苞心状卵形，颜色有红色、粉色、白色、绿色等，肉穗花序无柄、黄色，适宜的生长条件下全年均可开花。因其花叶奇特，花期长达数月之久，广泛应用于室内外花卉的装饰。

红掌生长周期较长，常规的种子繁殖和分株繁殖很难满足花卉市场的需求，植物组织培养技术无疑是缩短繁殖周期、大量供应种苗的有效途径，并能保证母本的优良品种特性。自上个世纪七十年代，国外Pierk等人利用叶片外植体成功建立红掌组织培养体系以来，组织培养繁殖方法逐步取代了传统繁殖方法，我国在成功引进红掌栽培以来，因其叶花特色，受到国人的喜爱，国内市场对红掌种苗的需求日益扩大，国内纷纷对其组织培养再生技术进行了研究，并取得了一定的进展，但还存在一定问题，如外植体选择、处理方法、培养基组成、激素条件等方面尚无相对统一的说法，结论呈多样性，这与研究者选择的试验品种不同有关，由于品种间差异造成了结论各异。因此，有必要针对红掌不同品种进行离体组织培养与植株再生技术的研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种脱分化、再分化及增殖培养效率高，适用于现行红掌盆栽品种离体组织形成再生植株的培养方法，能快速大量繁殖优良红掌盆栽品种。

实现本发明目的的技术方案是提供一种红掌盆栽品种的离体组织培养方法，包括如下步骤：

1、外植体选择：取展叶5～10 d的叶片、未展开叶的叶柄、初花5～8 d的花序、佛焰苞片、以及侧芽为外植体材料，用洗液洗净材料表面，流水下冲洗30～50 min，取出后晾干；

2、外植体灭菌：将清洗过的叶片、叶柄和佛焰苞片外植体材料，用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理3～10min；将清洗过的花序和侧芽外植体材料，先经体积浓度为70%～75%的酒精处理10～20s，再用质量浓度为0.05%～0.1%的HgCl₂处理6～12 min，无菌水冲洗5～6次；

3、初代培养：将灭菌后的外植体材料接种于培养基中，培养温度22～26℃，光照12～14 h/d，光强1500～2000 lx，经40～60 d后形成具有分化能力的愈伤组织；

4、愈伤组织继代与不定芽分化培养：将步骤3中得到的愈伤组织，继代培养1～2次后，每次为25～30 d，愈伤组织分化产生不定芽；

5、试管苗的增殖培养：以2～4芽带愈伤组织的不定芽丛，接种至试管苗增殖培养基，30～40 d后，试管苗生长良好，株高达到2～4cm，并伴有少量气生根产生，平均每次继代1瓶可转接3～4瓶；

6、生根培养：将株高3 cm以上、具3～4叶的试管苗，转入生根培养基，25～30 d后获得完整根系的再生植株。

用于叶片愈伤组织诱导时，步骤3所述的培养基包括：基本培养基1/2MS+0.5～5.0 mg/L的玉米素+0.1～1.0 mg/L的 2,4-二氯苯氧乙酸+质量浓度为2～3%的蔗糖，pH 为5.6～5.8。用于叶柄愈伤组织诱导时，步骤3所述的培养基包括：基本培养基1/2 MS+0.5～6.0 mg/L的噻苯隆+0.1～1.0 mg/L 的2,4-二氯苯氧乙酸+质量浓度为2～3%的蔗糖，pH 为5.6～5.8。

步骤5所述的试管苗增殖培养基包括：基本培养基1/2 MS+0.5～3.0 mg/L 的6-苄基腺嘌呤+0.1～1.0 mg/L的α-萘乙酸+100～150 mg/L的水解酪蛋白+质量浓度为2～3%的蔗糖， pH 为5.6～5.8。

步骤6所述的生根培养基包括：基本培养基1/2 MS+ 0.1～1.0 mg/L的α-萘乙酸+300～1000 mg/L的活性炭， pH为5.6～5.8。