[发明专利]一种猪毛中瘦肉精的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，具体地涉及一种瘦肉精的检测方法。

背景技术

瘦肉精是具有肾上腺素受体激动作用的一类药物的统称,又称B-兴奋剂,是一系列能够起到促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的药物，盐酸克伦特是目前最常用的瘦肉精药物药物之一。盐酸克伦特罗（clenbuterol,CLE）又称氨哮素、克哮素,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,熔点161e,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚。1964年首次在美国合成,主要作用是松弛气管平滑肌,医学上用于治疗哮喘。1984年美国科学家意外发现把盐酸克伦特罗添加在饲料中喂养牲畜,可明显促进畜体生长,减少胴体脂肪沉淀,提高瘦肉率。随后,欧美等国将瘦肉精广泛用于养殖业。我国是90年代初期在混合饲料中添加,经部分省市的养猪业试用后广为应用,成为动物源性食品/瘦肉精残留的隐患。

目前国际上对动物组织中盐酸克伦特罗残留的检测方法主要有色谱法包含了高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相-质谱联用(LC-MS)、薄层色谱法和气相色谱-傅里叶红外联用法等。但由于色谱法对仪器设备、操作人员的要求较高,耗时较长,在检测过程中往往是作为确认检验方法。免疫分析法包括酶联免疫吸附测定法、放射免疫分析法和滴金免疫技术。由于放射免疫法存在仪器价格较高、放射性废弃物不易处理的缺点,应用较少。酶联免疫吸附测定法检测时,会有假阳性出现,需要采用高效液相色谱法或气相色谱-质谱法进行确证。目前瘦肉精日常检测的方法是:采集猪尿,采用酶联免疫法或金标试纸法筛选,但是同样存在假阳性问题，并且直接采集猪尿检测的方法存在药物残留周期短的问题，难以实现对药物残留情况的实时跟踪和监测。

发明内容

本发明的目的即在于提供一种猪毛中瘦肉精的快速检测方法，通过现场采集猪毛，并通过简单前处理，可实现对猪毛中盐酸克伦特罗的快速检测。

本发明的技术方案如下：

一种猪毛中瘦肉精含量的检测方法，包括如下步骤：

1）毛发消解：称取0.200g毛发加3-5ml0.5-2摩尔碱液，70-90℃消解5-15分钟，离心，取上清液待用；

2）液液萃取：在上清液中加入8-12ml有机溶剂，进行液液萃取，静止分层后取下层清液，再将下层清液加入4-6ml0.05-0.2M HCl再次萃取，静止分层后取上层清液，即为样品提取液；

3）固相萃取：取PCX固相萃取柱，水和甲醇活化之后，样品提取液过柱，用水和甲醇体积比1:1的混合溶液淋洗柱子，抽干萃取柱，用3-5%氨化甲醇洗柱并收集，水浴从氮吹至近干（一般吹至剩余50μl左右，成为浓缩液体），取出冷却；

4）将上述浓缩后的液体和纳米金属粒子混合后进行测试，得到SERS（表面增强拉曼光谱）谱图。

其中，步骤1）所述的碱液包括氢氧化钠或氢氧化钾等。

其中，步骤1）所述的离心，取上清液待用具体操作为：6000-9000转离心2-10分钟，倾出上清液，再加入0.5-2摩尔碱液0.8-1.2mL，6000-9000转离心2-10分钟，合并上清液待用。

其中，步骤2）所述的有机溶剂包括二氯甲烷、丙酮、己烷中一种。

其中，步骤3）水浴温度为30-60℃。

步骤4）所述的金属纳米粒子包括金纳米粒子、银纳米粒子或铜纳米粒子。

其中，步骤4）所述的测试为：往上述浓缩后的液体中加入5-30μl纳米金溶胶,混合,并置于拉曼样品台上，利用便携式拉曼光谱仪进行检测。

表面增强拉曼光谱(SERS)技术由于高达单分子的检测灵敏度以及易于获得全波段的振动光谱等优点正发展成为一种具有广泛应用前景的分析检测手段。本发明以表面增强拉曼光谱(SERS)作为检测方法，以纳米金属粒子作为SERS基底，将猪毛通过前处理对毛发上残留的盐酸克伦特罗进行富集分离，通过便携式拉曼光谱仪，得到盐酸克罗特罗的SERS谱图。本发明的优点如下：

1、本发明的检测样品为猪毛，由于毛发的生长周期长，同采集猪尿检测的方法相比，具有可追踪的时间长的优点；

2、利用便携式拉曼光谱仪进行检测，操作简便、快捷；

3、具备较好的杂质去除效果，检测效果良好，检测准确性高，不会有假阳性情况发生，在检测过程中可避免误判情况发生。

4、灵敏度高，最低检测限可以达到1ppm。

附图说明

图1为本发明实施例1CLE标准品的曲线图；