[发明专利]一种高特异高敏感检测金黄色葡萄球菌的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及疾病检测技术领域，具体的说，是一种高特异高敏感检测金黄色葡萄球菌的方法。

背景技术

 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染和食物中毒。急需特异性和敏感度高的快速诊断试剂。

 环介导等温扩增技术是由日本荣研（EIKEN）株式会社开发的高特异性敏感度的核酸检测系统，无须昂贵的设备，已经成为核酸快速检测法的良好手段，本发明结合环介导等温扩增技术，设计针对金黄色葡萄球菌特异性基因序列的一对外引物（SA-F3和SA-B3）和一对内引物（SA-FIP和SA-BIP）进行环介导等温扩增。

发明内容

本发明公开了一种高特异高敏感检测金黄色葡萄球菌的方法，提高了它的检测和诊断效率。

样处理厂的告知系统为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

一种高特异高敏感检测金黄色葡萄球菌的方法，包括以下步骤：

步骤1）制备反应液

反应液组成及含量为

8u/ul Bst核酸聚合酶                          8u

10X耐热聚合酶反应缓冲液                  1X,MgSO4 2mM

4M 甜菜碱                                    1M

10mM d-NTP混合液                           400μM

内引物

    SA-FIP                                   40umol

    SA-BIP                                   40umol

外引物

    SA-F3                                    5umol

    SA-B3                                    5umol

标本核酸                                     20ng

添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul;

步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min，浑浊为阳性;

步骤3）提取临床分离金黄色葡萄球菌及金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923，以及若干临床分离头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸,多次进行反应，观察它们的阴阳性。

进一步的，所述外引物SA-F3的序列为CCAGACTCGGGTCAGGAA。

进一步的，所述外引物SA-B3的序列为ACTTCCCAAAATGCGCTCC。  

进一步的，所述内引物SA-FIP的序列为

AACGGCTTAGTGGCTGTGTCAT-CTCCATAGTCGCGACGTTTC。

进一步的，所述内引物SA-BIP的序列为TTACGAAGGCGATGTGTGCCG-GGTCGTGCAGCAATTCAGG。

 

进一步的，所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。

本发明的有益效果是：

    本发明通过配制反应液，设计引物序列，能快速、准确的检测金黄色葡萄球菌，并及时采取相应的措施，减少了疾病的发生率。

具体实施方式

下面将结合实施例，来详细说明本发明。

 一种高特异高敏感检测金黄色葡萄球菌的方法，包括以下步骤：

步骤1）制备反应液

反应液组成及含量为

8u/ul Bst核酸聚合酶                          8u

10X耐热聚合酶反应缓冲液                  1X,MgSO4 2mM

4M 甜菜碱                                    1M

10mM d-NTP混合液                           400μM

内引物