[发明专利]一种等温扩增核酸片段的方法无效
| 申请号： | 201310068455.2 | 申请日： | 2013-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN103146684A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 王德国;曲海涛;张文超;张小辉;王树芬;郭山鹿 | 申请（专利权）人： | 许昌学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 郑州科维专利代理有限公司 41102 | 代理人： | 辛国瑞 |
| 地址： | 461000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 等温 扩增 核酸 片段 方法 | ||
1.一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：使用与核酸片断3个区域互补的一对引物，在DNA聚合酶的作用下通过链替代反应等温扩增核酸片段。
2.根据权利要求1所述的一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：针对特异性靶序列，采用PrimerPremier5.0等引物设计软件，设计两对类似于巢式PCR又不具有重叠序列的引物F1、F2、R2、R1，其中，F2的互补序列F2C连在F1的5’端，或R2的互补序列R2C连在R1的5’端。
3.根据权利要求2所述的一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：所述的引物设计方法，引物组合方式分别为F2C-F1、R1；F1、R2C-R1；任何一种组合方式都可以实现核酸片段的等温扩增。
4.根据权利要求1所述的一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：该反应是在具有链替代作用的DNA聚合酶的催化下进行的，反应温度为65℃左右。
5.根据权利要求4一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：所述的具有链替代作用的DNA聚合酶，为Bca（exo-）DNA聚合酶，或Bst DNA聚合酶，或Bca（exo-）DNA聚合酶与Tag DNA聚合酶的混合物，或Bst DNA聚合酶与Tag DNA聚合酶的混合物，或其他具有相似作用的酶或酶的混合物。
6.根据权利要求1所述的一对引物等温扩增核酸片段的方法，其特征在于：核酸片段为DNA或mRNA，核酸片段为mRNA时，先使用逆转录酶将mRNA反转录成cDNA。
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