[发明专利]一种绵羊肺炎支原体灭活疫苗的制备工艺

说明书

技术领域    

     本发明涉及兽用生物制品中绵羊肺炎支原体灭活疫苗，具体涉及绵羊肺炎支原体灭活疫苗的制备工艺。

背景技术    

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）引起绵羊及山羊非典型肺炎，临床上以流鼻涕、咳嗽、渐进性消瘦和增生性间质性肺炎为主要特征。1963年Mackay等首次从患肺炎的绵羊肺中分离得到MO，此后在其它多个国家和地区相继报道MO感染引起绵羊和山羊发病。目前绵羊肺炎支原体在全球范围内分布，近年来该病的发生率呈逐年上升趋势，给养羊业造成巨大经济损失。此外，羊只感染绵羊肺炎支原体后，对其它病原（如多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌及流感病毒）的易感性明显增加（[1]Dassanayake RP, Shanthalingam S, Herndon CN, Subramaniam R, Lawrence PK, Bavananthasivam J, Cassirer EF, Haldorson GJ, Foreyt WJ, Rurangirwa FR, Knowles DP, Besser TE, Srikumaran S. Mycoplasma ovipneumoniae can predispose bighorn sheep to fatal Mannheimia haemolytica pneumonia. Vet Microbiol., 2010, 145(3-4): 354-359.），从而使其危害性更为突出。绵羊肺炎支原体在我国流行同样十分广泛，危害严重（[2]郭晗, 储岳峰, 赵萍, 高鹏程, 贺英, 冯晓明, 樊祜卿, 逯忠新. 青海省绵羊肺炎支原体的血清学调查. 安徽农业科学, 2009, 37(33): 16391-16409.[3]张萍慧, 郝永清, 张爱荣, 范利霞, 白龙. 绵羊肺炎支原体的分离与鉴定. 畜牧与饲料科学, 2010, 31(1): 142-143.[4]王华，杨发龙，王永，汤承. 四川省山羊支原体性肺炎流行病学调查, 中国畜牧兽医，2011, 38(1): 210-213.），对该病的综合防治迫在眉睫。

针对绵羊肺炎支原体，采用药物治疗可收到一定效果，但不易根治本病，且存在药物残留、对肉质的影响及用药后易产生耐药株等一系列问题。因此，研制安全有效的疫苗，实施预防免疫是防控MO感染最为有效的方法。在疫苗研制方面，由于支原体的基因组较小，生物合成能力较弱，免疫原性较差，在实际应用中保护率低，一直是生产中需要解决的问题。此外，影响疫苗免疫效果的关键在于疫苗的制备工艺，其中抗原内毒素的含量和佐剂的选用对疫苗质量的影响很大。为了提高疫苗的安全性，必须降低抗原内毒素的含量；为了提高抗原的免疫原性，必须在抗原中添加佐剂以增强其诱导免疫反应的能力（[5]Cupla R K, Relyve E H, Lindblad E B, et al. Adjuvant balance between luxieity and adjuvanlicity[J]. Vaccine, 1993, 11: 293-306）。佐剂的种类很多,不同的佐剂免疫增强效力有所不同。目前未见制备绵羊肺炎支原体灭活疫苗去除抗原内毒素及不同佐剂免疫辅佐效力评价的报道。

发明内容  

      鉴于现有技术的不足，本发明的目的是改良绵羊肺炎支原体灭活疫苗的制备工艺，制备一种安全有效的绵羊肺炎支原体灭活疫苗。本发明使抗原内毒素含量大大降低，提高了疫苗安全性。另外，本发明还筛选到理想的绵羊肺炎支原体高效灭活疫苗佐剂。疫苗免疫羊只后，抗体产生早、效价高、持续时间长，可有效防控绵羊肺炎支原体感染。

附图说明  

图1 绵羊肺炎支原体灭活疫苗免疫羊血清抗体效价

具体实施方式

本发明的目的是通过以下技术方案实现的，一种绵羊肺炎支原体灭活疫苗的制备工艺，包括以下步骤：

1.抗原制备

（1）培养基的制备

   采用改良Thiaucourt’s培养基。培养基成分如下：PPLO肉汤 21.0 g，新鲜酵母浸出液 100 mL，灭活马血清200 mL，0.5g/ml的葡萄糖2ml，0.5g/mL的丙酮酸钠8 ml，0.5%酚红3.2 ml，10000U/mL青霉素10 ml，醋酸铊 0.1 g，用去离子水补足到1000 mL，调节pH值7.6～7.8，经0.22μm细菌滤器过滤除菌后分装，于4℃保存备用。