[发明专利]一种大黄药材的指纹图谱的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种大黄药材指纹图谱的鉴别方法，具体地说是用高效液相色谱指纹图谱法来对大黄药材的有效成分进行质量控制的一种鉴别方法。

背景技术

大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效，为《中华人民共和国药典2010版》一部收载品种。大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum, L．、唐古特大黄Rheum tanguticum／ Maxim. ex Balf.或药用大黄RheumojflcinaleBaill.的干燥根和根茎。大黄药材中的主要成分是蒽醌苷及双蒽酮苷，其醌苷有： 大黄酚-1-葡萄糖苷或大黄酚苷、大黄素-6-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-葡萄糖苷、大黄素甲醚葡萄糖苷、大黄酸-8-葡萄糖苷；掌叶大黄中还含有大黄素双葡萄糖苷、芦荟大黄素双葡萄糖苷、大黄酚双葡萄糖苷。双蒽酮苷有番泻苷A、B、C、D、E、F。游离型蒽醌类主要有：大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸。大黄又含有大黄鞣酸及其相关物质, 如没食子酸、儿茶素、大黄四聚素。此外，大黄尚含有脂肪酸、草酸钙、葡萄糖、果糖和淀粉。目前大黄药材的质量控制方法主要有：以芦荟大黄素(C₁₅H₁₀O₅)、大黄酸(C₁₅H₈0₆)、大黄素(C₁₅H₁₀0₅)、大黄酚(C₁₀H₁₀0₄)和大黄素甲醚(C16H1205)的总量测定作为含量测定方法《中华人民共和国药典2010版一部》；中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。中国食品药品监督管理局于2000年颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》，要求中药注射剂必须进行指纹图谱的研究，并建立其相关的标准。规范了中药指纹图谱的研究，从而掀起了国内近几年来对指纹图谱的研究热潮。目前，对中药材质量控制较成熟的方法有单个成分含量测定或一类成分如总皂苷、总黄酮等的紫外分光光度测定法，不能对制剂进行全面直观的质量控制。采用指纹图谱技术除了能反映几乎全部成分的含量、种类外，尚能反映成分的比例、未知成分（含量测定方法中可能已被作为无效或干扰成分扣除）的产生，更多的是从药物稳定性、安全性上进行监测。

《中国药典》2010年版，采用薄层色谱法对大黄药材进行鉴别，由于薄层色谱法鉴别法本身受温度、湿度、薄层板厚度以及载样量等诸多因素影响，存在样品的化学成分体现不完全，可鉴别的成分数量较少，同一样品的重现性不佳的缺点，而已有文献报道的大黄指纹图谱技术，图谱中体现的化学成分较少，提供的信息量小，不能很好地代表大黄药材的整体质量，不能对大黄药材的质量进行有效的鉴别。而采用本发明方法则可充分展示大黄化学成分的指纹图谱，信息量丰富，方法重现性良好，可有效鉴别大黄药材的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种大黄药材的指纹图谱鉴别方法，通过指纹图谱测定对大黄药材进行全面而有效的鉴别。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

本发明大黄药材的指纹图谱鉴别方法，该方法包括如下步骤：

(a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈或甲醇、乙腈甲醇混合溶剂为流动相A，以甲酸水溶液或冰醋酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液为流动相B。检测器为紫外检测器、示差检测器或蒸发光检测器；

(b)供试品溶液的制备取大黄药材粉末（过筛），精密称定，加水浸泡，加热回流，提取液离心，滤过，取滤液，加入乙醇，静置一夜。吸取上清液，热空气吹干，加水溶解，用微孔滤膜滤过，取续滤液，备用。

(c)测定法 吸取供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

进一步优选的测定条件为：

(a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长10～25cm，内径3～5cm，粒径为1～10μm)；以乙腈为流动相A，以0.01～2%冰醋酸水溶液为流动相B；紫外检测器，检测波长200～400nm；柱温20～50℃，流速为每分钟0.2～2ml。