[发明专利]文冠果果壳总皂苷的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及文冠果总皂苷的提取方法，具体涉及纤维素酶在文冠果果壳总皂苷的提取工艺中的具体应用。

背景技术

文冠果果壳（Xanthoceras sorbifolia Bunge）为无患子科(Sapindaceae)文冠果属植物文冠果的果壳。经研究，文冠果果壳总皂苷为文冠果果壳中主要成分，文冠果果壳总皂苷不仅具有良好的抗肿瘤活性，而且能显著改善多种记忆障碍模型小鼠的学习能力，提高大脑的缺氧耐受能力，预防并治疗多发性栓塞引起的记忆保持障碍，降低谷氨酸造成的PC12细胞死亡数量，增强对神经细胞的保护作用（1.李占林，李铣，李宁，李文，沙沂.文冠果果壳的化学成分.沈阳药科大学学报2005，22（4）：271-272；2. 刘新霞 ，纪雪飞 ，陆玲玲 ，杨柏珍，王力华，邹莉波，文冠果果壳乙醇提取物对大鼠学习记忆障碍的改善作用.中草药2007，38（12）：1859-1863.）。鉴于传统的醇提方法提取文冠果果壳总皂苷效率较低的原因，影响了药材中总皂苷的应用，因此有必要开发一种更好的提取方法，从而提高总皂苷的提取率，进而扩大文冠果药材中总皂苷的利用。

发明内容

本发明的目的是针对传统的醇提方法提取文冠果果壳总皂苷效率较低的缺陷，开发一种提取效率更高的提取方法。

本发明利用酶破坏细胞壁提高溶出的作用，对药材先进行酶前处理，在结合醇提方法来提高文冠果果壳总皂苷的溶出。

本发明的目的是这样实现的：

将文冠果果壳粉碎，过40-120目筛，加入酶进行酶解，酶灭活后，碱调pH，加乙醇，使醇达到50%-90%，优选60%-80%，更优选70%，提取，回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏经水分散，用有机溶剂萃取后得到总皂苷提取物。

将文冠果果壳总皂苷提取物用甲醇定容得供试品溶液。取供试品溶液，进行显色后测定紫外光谱，得总皂苷含量大于65%。

  所述的文冠果果壳来源于无患子科(Sapindaceae)文冠果属植物文冠果植物的果壳，包括果柄。

  所述的酶选自纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、磷脂酶或其他能水解细胞壁的酶（包括天然和合成的酶），质量百分比（酶与药材的质量百分比）为0.5%-8%，优选1%-5%，更优选1%,优选纤维素酶。

  所述的酶解过程为文冠果果壳与酶在缓冲溶液中恒温加热酶解。

  所述的缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸钠、磷酸氢二钠-枸橼酸、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠或其他缓冲溶液，所用体积为4-8ml, pH=3-8。

  所用的碱选自NaOH、柠檬酸钠，pH值为6.5-7.5。

  所述的醇提的提取方式包括回流、超声、浸取、渗漉、温提中的一种或几种，优选回流提取。

  所述的萃取中的有机溶剂选自乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，甲醇，乙醇，或丙酮、乙醇、甲醇的水溶液中的一种或几种，萃取溶解次数为1次或多次。

  酶解过程中温度范围：40-50℃，酶解2-5h。

    本发明能够提高文冠果果壳中总皂苷的含量，应用本方法获得文冠果果壳总皂苷提取物的收率为5%以上，总皂苷含量大于65%，含量测定方法采用香草醛-浓硫酸法，以人参皂苷Re为参照。

具体实施方式

下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：

文冠果果壳总皂苷提取原工艺 ：

（1）文冠果果壳的粉碎：将文冠果果壳粉碎，过60目筛，备用。

（2）醇提：精密称取文冠果果壳粉末2g，加入40ml的50%、70%或90%乙醇，混合均匀；90℃回流提取2h；过滤，回收乙醇得浸膏，浸膏用8倍量水溶解，离心，取上清液。

（3）萃取：用乙酸乙酯（1：1，V/V）萃取3次除去部分杂质，水层继续用水饱和正丁醇（1：1，V/V）溶解萃取3次，合并正丁醇层，减压回收溶剂，浸膏经减压干燥称重0.09g（收率为 4.5% ），用甲醇定容到100ml，得总皂苷供试品溶液。

实施例2：

文冠果果壳总皂苷的酶-醇提取工艺：

酶种类、酶加入量对文冠果果壳总皂苷含量的影响，结果如下：

故优选纤维素酶，酶加入量为每克药材加入纤维素酶1%-5%，更优选1%（质量百分比）。

（1）文冠果果壳的粉碎：将文冠果果壳粉碎，过60目筛，备用。