[发明专利]体内ADCC模型

说明书

技术领域

本发明的领域是包含人源化低亲和性Fc-γ受体（FcgR）基因座的转基因非人动物，包括包含用人低亲和性FcgR基因替代内源性低亲和性FcgR基因的转基因非人动物，包括能够表达四个功能性人低亲和性FcgR基因的非人动物，和包括不表达内源性低亲和性FcgR基因的非人动物。

背景技术

已经证明，治疗性抗体（TherAbs）对于如赘生性疾病或自体免疫炎症痛苦这样的人类疾病的治疗是高度有效的。常常，TherAbs的治疗作用所基于的是肿瘤细胞的细胞毒性清除，这使得这些抗体制剂的效应子功能特性成为一个关键问题。鼠来源的TherAbs常常在所治疗患者中导致免疫反应（抗-药物抗体（ADA）反应）。尽管预期纯粹人TherAbs实质性地减轻了ADA反应问题，但在进入人治疗前其生物功效的可预测性在很大程度上仍然未得到解决。由于与新TherAbs研发相关的巨大成本，因此需要能够在该过程的早期预测其功效的工具。通常在异种移植物试验中测试抗肿瘤抗体药物的体内功效。由此，首先将靶标人肿瘤接种于免疫缺陷小鼠中，通常为Scid或RAG突变体，并且使其生长，接着注射TherAbs。通过TherAbs消除人肿瘤的能力来确定TherAbs的功效。在该系统中，接种的癌细胞的破坏很大程度上依赖于由引入的（人）TherAbs在（鼠）天然免疫系统细胞上激活的效应子功能。

抗原-抗体复合物与不同免疫细胞表面上的补体（C）或Fc-受体（FcR）的结合引发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC），由此免疫系统的效应细胞活跃地裂解靶（肿瘤）细胞。补体依赖性细胞毒性（CDC）、巨噬细胞-介导的吞噬作用或细胞溶解（如通过自然杀伤细胞（NK）或粒细胞诱发的）有助于癌细胞的破坏。

然而，这些机制的功效在不同的物种中不同，并且甚至在相同物种的不同个体中也是不同的。特别地，尽管小鼠只具有两个活化性低亲和性FcR基因（Fcgr3和Fcgr4），但人具有四个活化性低亲和性FcR基因（FCGR2A、FCGR2C、FCGR3A、FCGR3B）。此外，主要的功能性人FcR——FcγRIIIa（由FCGR3A基因编码）——存在于NK细胞和巨噬细胞中，而其鼠同系物FcγR4在粒细胞和巨噬细胞中被发现，但在NK细胞中未发现。人粒细胞表达FCGR3B——在小鼠中没有对应物的FcR。最后，低亲和性小鼠Fcg3在巨噬细胞、NK细胞和粒细胞中表达，而其人同系物FcgR2a只在巨噬细胞和粒细胞中找到，同时人变体FcgR2c专门在NK细胞中表达，但只存在于20%人群中。因此，由于小鼠和人效应细胞中完全不同的FcgR表达，在小鼠异种移植物系统中评价人治疗性抗体的生物功效，具有差的预测价值。由于鼠和人效应细胞与机制之间内在的差异，获得的异种移植物试验的数据对于TherAbs在小鼠中的功效比对于其在人中的功效，更有预测性。

迄今为止，已经研发了各种更为接近地模拟人效应细胞和-机制的体内模型。例如，已经产生了表达单个人FcgR基因的转基因小鼠。然而，就细胞分布和表达水平两者而言，这种小鼠模型只有部分与人类相当。看起来，低亲和性FcgR基因的高保守性基因座（在人类和小鼠中都位于染色体1上）在基因内区段中包括调控元件，其是各FcgR基因忠实表达所需要的，并且不能与该局部遗传环境脱离。

因此，另一种方法是，通过使用携带多达200kb基因组人DNA的转基因细菌人造染色体（BAC），在转基因小鼠中复制人表达模式。然而，在BAC转基因小鼠中，表达人和内源性小鼠FcgR，导致异常升高的FcgR整体水平。此外，所得到的细胞分布是鼠和人表达模式的总和。

因此，仍然需要在非人动物中再现人FcgR基因表达的体内模型，以用于提高异种移植物试验的预测潜能。

发明内容

本发明涉及具有人源化低亲和性FcgR基因座的新转基因非人动物。非人动物可以是任何非人动物。优选，非人动物是哺乳动物，更优选啮齿动物，如大鼠或小鼠，最优选，非人动物是小鼠。在优选的实施方案中，所述非人动物是小鼠。

本文中提供了包含人低亲和性FcgR基因替代内源性低亲和性FcgR基因的转基因非人动物，包括能够表达四个功能性人低亲和性FcgR基因的非人动物，并且包括不表达内源性低亲和性FcgR基因的非人动物。在一个实施方案中，所述四个功能性人低亲和性FcgR基因是FCGR2A、FCGR3A、FCGR2C和FCGR3B。