[发明专利]一种沙丁胺醇人工抗原合成方法及在胶体金免疫试纸条的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物化工技术领域，具体地，涉及一种沙丁胺醇人工抗原合成方法及在胶体金免疫试纸条的应用。 

背景技术

随着社会进步和人们生活水平的提高，食品中兽药残留问题越来越引起人们的重视。人们的身心健康需要得到越来越高的重视。要提高畜禽产品的安全，除了严格控制疫情和加强管理外，对兽药及添加剂等有毒化学物质残留的监测与控制至关重要，所以科学可靠的兽药残留检测方法是评价动物源食品质量安 

全与否的科学保证。

沙丁胺醇(salbutamol，SAL)是一种选择性β2受体激动剂，白色或类白色的粉末，无臭，味微苦，在水中易溶，能溶于甲醇，具有强效松弛支气管平滑肌作用，临床用于支气管哮喘的防治和治疗。其又名舒喘宁、索布胺、阿布叔醇等，化学名为 4-羟基-5-羟甲基-α-(叔丁胺)甲基苯乙醇胺，分子式C₁₃H₂₁NO₃，相对分子质量为239。SAL一般为人工合成。沙丁胺醇临床最初是用于支气管哮喘的防治和治疗，但由于SAL和最早用于饲料添加剂的盐酸克伦特罗(CL)结构和性质相似，而盐酸克伦特罗目前的监管力度较大，所以近年来不法分子使之成为 CL 的替代品，将SAL添加于饲料的主要目的是促进动物生长，使动物体内的营养成分由脂肪向肌肉转移，表现为营养“再分配效应”，具有调控动物体营养代谢路径，增强脂肪分解代谢，促进蛋白质合成，显著增加酮体瘦肉率的作用。动物饲用含SAL 的饲料，便会大量积蓄体中，存留时间较长，而且一般烹饪过程很难使其失活、清除，人长期食用会出现心悸、头痛、恶心、呕吐、肌肉痛、战栗、神经过敏、肌肉振颤等，特别是可诱发和加重糖尿病、心血管、脑血管系统病人的病情，所以要严禁含SAL的食品流入市场。 

胶体金是由氯金酸(HAuCl₄)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。 胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。 

发明内容

本发明的一个目的是克服现有沙丁胺醇检测技术的不足，提供一种新的沙丁胺醇人工抗原，基于所述抗原可以建立方便、快捷、特异、准确的沙丁胺醇胶体金检测方法。 

   本发明的另一个目的是提供基于所述抗原的沙丁胺醇胶体金检测方法。 

本发明的目的通过以下技术方案予以实现： 

一种沙丁胺醇人工抗原，所述沙丁胺醇人工抗原的结构式如式（Ⅰ）所示：

所述protein（即载体蛋白）为牛血清白蛋白或卵清蛋白。

一种制备如上所述沙丁胺醇人工抗原的方法，包括以下步骤： 

S1.将硫酸沙丁醇溶于PB缓冲液中得到硫酸沙丁胺醇溶液；

S2.向S1所述硫酸沙丁胺醇溶液中加入甲醛，反应；

S3.向S2加入载体蛋白，反应后透析，收集透析液即得沙丁胺醇人工抗原；

其中，S3中所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白。