[发明专利]一种沙丁胺醇人工抗原合成方法及在胶体金免疫试纸条的应用有效
申请号: | 201210588392.9 | 申请日: | 2012-12-31 |
公开(公告)号: | CN103073635A | 公开(公告)日: | 2013-05-01 |
发明(设计)人: | 陈观银;黄显会;李帅鹏 | 申请(专利权)人: | 华南农业大学 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;C07K14/77;G01N33/558 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 任重 |
地址: | 510642 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 沙丁胺醇 人工 抗原 合成 方法 胶体 免疫 试纸 应用 | ||
1.一种沙丁胺醇人工抗原,其特征在于所述沙丁胺醇人工抗原的结构式如式(Ⅰ)所示:
所述protein即载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白。
2.一种制备如权利要求1所述沙丁胺醇人工抗原的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.将硫酸沙丁醇溶于PB缓冲液中得到硫酸沙丁胺醇溶液;
S2.向S1所述硫酸沙丁胺醇溶液中加入甲醛,反应;
S3.向S2加入载体蛋白进行偶联反应,反应后透析,收集透析液即得沙丁胺醇人工抗原;
其中,S3中所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白。
3.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于,S3中所述载体蛋白为牛血清白蛋白时,硫酸沙丁胺醇与牛血清白蛋白的质量比为5~10:1;载体蛋白为卵清蛋白时,硫酸沙丁胺醇与卵清蛋白的质量比为1:50~100。
4.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于,S1中所述PB缓冲液的pH值为6.0,浓度为0.05M。
5.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于, S2中所述甲醛的用量按照50mg硫酸沙丁醇加100~200ul甲醛的比例确定。
6.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于,S2中所述反应的时间为5~20分钟;S3中偶联反应的时间为24~48小时。
7.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于, S3中所述透析是采用磷酸盐缓冲液为透析液,所述磷酸盐缓冲液pH值为7.38~7.45,浓度为0.01M/L。
8.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于,S3中所述载体蛋白为牛血清白蛋白时,合成的抗原为沙丁胺醇免疫原;所述载体蛋白为卵清蛋白时,合成的抗原为沙丁胺醇包被原。
9.一种利用权利要求1或2所述沙丁胺醇人工抗原的沙丁胺醇胶体金法检方法。
10.根据权利要求9所述方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
S1.用权利要求8所述沙丁胺醇免疫原免疫动物;
S2.收集并纯化抗体;
S3.将抗体喷涂于玻璃纤维纸上得到胶体金-多抗结合物玻璃纤维条;
S4.将权利要求8所述沙丁胺醇包被原喷涂于硝酸纤维素膜上制备检测线,同时将羊抗兔IgG二抗喷涂于硝酸纤维素膜上制备质控线;
S5.将样品垫、S3中胶体金-多抗结合物玻璃纤维条、S4中含检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸组装成胶体金试纸条;
S6.检测。
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