[发明专利]含有检测标签IgG的表达载体、构建方法及其应用

权利要求书

1.一种含有检测标签IgG的表达载体，其特征在于，所述检测标签IgG为至少一个种属的IgG的恒定区基因；在表达载体中插入至少一个种属的IgG的恒定区基因得到所述含有检测标签IgG的表达载体。

2.根据权利要求1所述的含有检测标签IgG的表达载体，其特征在于，所述至少一个种属的IgG的恒定区基因包括人IgG的恒定区基因、兔IgG的恒定区基因、鼠IgG的恒定区基因、羊IgG的恒定区基因、马IgG的恒定区基因、牛IgG的恒定区基因、猪IgG的恒定区基因、猴IgG的恒定区基因、鸡IgG的恒定区基因、鸭IgG的恒定区基因、狗IgG的恒定区基因和熊猫IgG的恒定区基因。

3.含有检测标签IgG的表达载体的构建方法，其特征在于，所述检测标签IgG为至少一个种属的IgG的恒定区基因；所述方法包括以下步骤：

S1、设计所述至少一个种属的IgG的恒定区基因的上游引物和下游引物；

S2、以至少一个种属的cDNA为模板，采用所述上游引物和下游引物进行PCR扩增，得到至少一个种属的IgG的恒定区基因；

S3、将所述至少一个种属的IgG的恒定区基因与表达载体连接，构建成含有检测标签IgG的表达载体。

4.根据权利要求3所述的含有检测标签IgG的表达载体的构建方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述表达载体包括pET系列表达载体、GST系列表达载体、pTrxA系列表达载体、pCDNA3.1/His C系列表达载体、pCDNA5/FRT/TO系列表达载体、pEGFP-N1系列表达载体和pBudce4.1系列表达载体。

5.含有检测标签IgG的表达载体在目的蛋白的表达检测中的应用，其特征在于，所述检测标签IgG为至少一个种属的IgG的恒定区基因；通过所述至少一个种属的IgG的恒定区基因与所述至少一个种属的二抗的直接反应实现所述目的蛋白的表达检测。

6.根据权利要求5所述的含有检测标签IgG的表达载体的应用，其特征在于，包括以下步骤：

获取至少一个种属的IgG的恒定区基因；

构建含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体；

获取目的蛋白基因，并将所述目的蛋白基因连接于含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体；

将连接有目的蛋白基因、且含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体转染于表达菌株中进行诱导培养，收集表达产物；以及

采用所述至少一个种属的二抗进行ECL显色，以检测所述目的蛋白的表达。

7.根据权利要求6所述的含有检测标签IgG的表达载体的应用，其特征在于，获取至少一个种属的IgG的恒定区基因包括：

设计所述至少一个种属的IgG的恒定区基因的上游引物和下游引物；

以至少一个种属的cDNA为模板，采用所述上游引物和下游引物进行PCR扩增，获取至少一个种属的IgG的恒定区基因。

8.根据权利要求6所述的含有检测标签IgG的表达载体的应用，其特征在于，构建含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体包括：

同时双酶切表达载体和至少一个种属的IgG的恒定区基因；

利用DNA电泳同时回收双酶切产生的基因片段和载体片段；以及

将所述载体片段和所述基因片段用连接酶进行连接反应，以构建含有至少一个种属的IgG的恒定区基因的表达载体。