[发明专利]适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原，其特征在于按下述步骤得到：

第一步，采集绵羊囊型包虫病包囊液，在包囊液中加入固体硫酸铵溶解，使包囊液中硫酸铵的浓度达到饱和浓度的30％，用氢氧化钠或氢氧化铵调节至pH 7.2，然后按调节pH后液体体积的30％至50％的量加入氯仿或石油醚，剧烈振荡成混悬液，混悬液静置至氯仿或石油醚与包囊液分层，再剧烈振荡并静置分层2次，然后4000g离心20min后，弃沉淀和氯仿或石油醚，收集处理后的包囊液；

第二步，在第一步处理后的包囊液中加入固体硫酸铵溶解，使处理后的包囊液中硫酸铵浓度达到饱和浓度的50％至70％，用氢氧化钠或氢氧化铵调节至pH 7.2，在温度为4⁰C至10⁰C的冰箱中放置4h，然后4000g离心10min后收集沉淀物，弃上清液；

第三步，将第二步收集的沉淀物加入到20倍沉淀物体积量的硫酸铵溶液中，硫酸铵溶液的pH 为7.2，硫酸铵的浓度为饱和浓度的50％至70％，振荡使其成为混悬液，然后4000g离心10min后，收集沉淀物，弃上清液；

第四步，将第三步收集到的沉淀物加入到20倍沉淀物体积量的硫酸铵溶液中，硫酸铵溶液的pH 为7.2，硫酸铵的浓度为饱和浓度的50％至70％，振荡使其成为混悬液，然后4000g离心10min后收集沉淀，弃上清液，在收集到的沉淀物中加入10倍沉淀物体积量的蒸馏水，振荡使沉淀物溶解后，加入与沉淀物溶解后溶液等体积量的氯仿或石油醚，剧烈振荡成混悬液，静置至氯仿或石油醚与溶液分层，再剧烈振荡并静置分层2次，收集水溶液；

第五步，将第四步收集的水溶液装入透析袋中，将透析袋放入生理盐水中，生理盐水的体积为透析袋中水溶液体积的20倍，在温度为4⁰C至10⁰C的冰箱中进行透析12h至24h，其间换生理盐水3次，每次更换生理盐水体积为透析袋中水溶液体积20倍，透析完成后，透析袋中的溶液4000g离心20min，弃沉淀，收集上清液，上清液即为囊型包虫病囊液脱酯抗原。

2.一种根据权利要求1或2所述的适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原的制备方法，其特征在于按下述步骤进行：

第一步，采集绵羊囊型包虫病包囊液，在包囊液中加入固体硫酸铵溶解，使包囊液中硫酸铵的浓度达到饱和浓度的30％，用氢氧化钠或氢氧化铵调节至pH 7.2，然后按调节pH后液体体积的30％至50％的量加入氯仿或石油醚，剧烈振荡成混悬液，混悬液静置至氯仿或石油醚与包囊液分层，再剧烈振荡并静置分层2次，然后4000g离心20min后，弃沉淀和氯仿或石油醚，收集处理后的包囊液；

第二步，在第一步处理后的包囊液中加入固体硫酸铵溶解，使处理后的包囊液中硫酸铵浓度达到饱和浓度的50％至70％，用氢氧化钠或氢氧化铵调节至pH 7.2，在温度为4⁰C至10⁰C的冰箱中放置4h，然后4000g离心10min后收集沉淀物，弃上清液；

第三步，将第二步收集的沉淀物加入到20倍沉淀物体积量的硫酸铵溶液中，硫酸铵溶液的pH 为7.2，硫酸铵的浓度为饱和浓度的50％至70％，振荡使其成为混悬液，然后4000g离心10min后，收集沉淀物，弃上清液；

第四步，将第三步收集到的沉淀物加入到20倍沉淀物体积量的硫酸铵溶液中，硫酸铵溶液的pH 为7.2，硫酸铵的浓度为饱和浓度的50％至70％，振荡使其成为混悬液，然后4000g离心10min后收集沉淀，弃上清液，在收集到的沉淀物中加入10倍沉淀物体积量的蒸馏水，振荡使沉淀物溶解后，加入与沉淀物溶解后溶液等体积量的氯仿或石油醚，剧烈振荡成混悬液，静置至氯仿或石油醚与溶液分层，再剧烈振荡并静置分层2次，收集水溶液；

第五步，将第四步收集的水溶液装入透析袋中，将透析袋放入生理盐水中，生理盐水的体积为透析袋中水溶液体积的20倍，在温度为4⁰C至10⁰C的冰箱中进行透析12h至24h，其间换生理盐水3次，每次更换生理盐水体积为透析袋中水溶液体积20倍，透析完成后，透析袋中的溶液4000g离心20min，弃沉淀，收集上清液，上清液即为适用于检测泡型包虫病抗体的囊型包虫病囊液脱酯抗原。