[发明专利]一种肾综合征出血热病毒IgM抗体检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物学检测技术领域，具体涉及一种肾综合征出血热病毒IgM抗体检测方法及试剂盒。

背景技术

肾综合征出血热（Hemorrhagic fever with renal syndrome，以下简称HFRS），我国习称流行性出血热（Epidemic hemorrhagic fever，EHF），是由汉坦病毒（Hantavirus，HV）引起的以发热、出血、肾脏损害为主要临床特征的自然疫源传染病，鼠为主要的传染源，寄生螨类参与传播，主要通过接触宿主动物排泄物经伤口、气溶胶、饮食传播。其临床表现复杂，预后差。

对HFRS的实验室诊断方法主要有常规检查、超声检查、基因检测、病毒分离鉴定与血清学检测等。目前临床主要依据患者的症状、体征及血、尿常规作诊断，这对一些典型病人尚可，而一旦遇到不典型的病人，诊断就比较困难，常造成误诊或遗漏，不仅使病人在经济上蒙受不应有的损失，甚至丧失最佳抢救治疗的时机，导致病人死亡，因此，早期诊断尤为重要。超声检查HFRS对仪器与技术要求较高。基因检测多采用反转录PCR（RT-PCR）技术，但由于HFRS病程早期病毒载量较小，故在临床标本的检测方面还不够稳定。病毒分离鉴定法所需周期较长且需要特殊设备。

血清学检测方法是HFRS早期检测的一种主要手段，如酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）、间接免疫荧光法（IFA）等，ELISA检出率高，敏感度和特异性都较好，但大都需要特殊设备，操作人员需要专门的操作技能，一次测试从采样到孵育、洗板、显色需要很长的时间，浪费大量人力物力，难以在缺少设备的边远山区、基层医院、诊所开展。间接免疫荧光法需要荧光显微镜等设备，在基层也受到一定限制。

流行性出血热起病后2～3天血清中可检测出流行性出血热IgM抗体，7～10天达高峰。而流行性出血热IgG抗体在病后数周出现，可持续多年，因此，IgM抗体阳性可对该疾病进行早期诊断。目前较为简便快捷的血清学检测主要是采用胶体金斑点渗滤法检测HFRS-IgM抗体，其原理为：液体通过微孔滤膜时，标本中的抗体与膜上的抗原相接触并结合，再加入金标记的抗人抗体显色，达到快速检测的目的（一般在3～5min左右完成），同时洗涤液的渗入在短时间内即可达到洗涤目的，成为“床边检验”主要方法之一。该方法以操作简单便捷、检测速度快、节省人力物力为特点，使得临床检验甚至可以在床边进行，不需任何仪器、设备及复杂的样本处理过程，结果立即可取，真正做到了床边检验（Point of Care Test，POCT），减轻了操作人员的劳动强度。但目前胶体金斑点渗滤试剂的金标液保存期较短，容易受外界温度等因素影响而发生沉淀等现象，某些诊断试剂盒的保存缓冲液出于商业原因等并未给出具体组分，给试剂盒的开发应用带来不便。另外，由于试剂盒洗涤液或样本方面的原因，例如溶血、高血脂、高胆红素等，本底会发红，影响结果判读，尤其是对于弱阳性标本检测结果的判读。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种适用于临床辅助诊断和鉴别的肾综合征出血热病毒IgM抗体检测方法及试剂盒，以解决现有技术存在的金标液保存期较短，容易受外界温度等因素影响而发生沉淀现象等问题。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种肾综合征出血热病毒IgM抗体的检测方法，在膜上固定肾综合征出血热病毒抗原，加入待检血清，待检血清中的肾综合征出血热病毒IgM抗体和所述固定在膜上的抗原结合，再加入含有鼠抗人IgM单抗的金标工作液，鼠抗人IgM单抗与待检血清中的肾综合征出血热病毒IgM抗体结合，显示出红色，最后加入洗涤液，洗去多余的金标工作液和其他杂质；

所述金标工作液采用如下方法制得：

⑴制备金标浓缩液：取0.5～1%的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.4～0.8wt%柠檬酸三钠溶液0.8～1ml，混匀，待溶液颜色由淡黄至蓝色至紫色至完全透明的酒红色，继续煮沸5～15分钟，停止加热，冷却至室温，向得到的溶液中加入1mg/ml的鼠抗人IgM单抗0.2～0.5ml，然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液；