[发明专利]一种红霉素B纯品的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，特别是一种红霉素B纯品的纯化方法。

背景技术

在《中国药典》2010版红霉素质量标准中，规定用高效液相色谱法对相关物质红霉素B进行测定，在红霉素B定性时，以相对保留时间进行。该法的弊端是，当采用不同型号的色谱柱时，红霉素B相对保留时间会有所不同。

欧洲药典委员会有红霉素B对照品出售，但其到货价格比较贵，约1700～2000元/支(每支50mg)，不利于普及使用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术不足，提供一种红霉素B纯品的纯化方法。

本发明的目的按照下述方案实现：

一种红霉素B对照品的纯化方法，将红霉素配制成溶液，利用高效液相色谱仪将红霉素B与红霉素及其他组分进行洗脱分离，将洗脱液pH调为酸性，加入醋酸丁酯振摇，静置分层，再将水相pH调节为碱性，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，蒸干，即得红霉素B纯品。

本方法采用制备液相色谱仪，将红霉素B与红霉素及其他组分分离，溶液用三氯甲烷进行萃取，低温挥干，得到红霉素B纯品，再用欧洲红霉素B对照品标定，得到含量。

从我们现在掌握的文献资料，未搜索到关于制备红霉素B纯品的文献。采用该方法可以制备红霉素B纯品，具有如下优势：①可以解决欧洲标准品价格昂贵，使用后成本高的缺点；②解决中国药品生物制品鉴定研究院未向市场供应红霉素B标准品的不足；③解决《中国药典》2010版红霉素质量标准中，因使用不同色谱柱，红霉素B相对保留时间变化给定性带来的困难。

具体实施方式

实施例1

1红霉素B的分离：

1.1色谱条件：色谱柱：Sinochrom300A ODS-AP10um；流动相：以磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾8.7g，加水1000ml，用20％磷酸调节pH值至8.2)-乙腈(40：60)为流动相；流速：22ml/min；检测波长：210nm。

1.2仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪

1.3溶液制备：

样品溶液制备：抽取一批红霉素B含量较高的样品，准确称取1.0g，加乙腈10ml使溶解，加流动相稀释至100ml，摇匀，即可。

对照溶液制备：精密称取红霉素B对照品10mg，置50ml容量瓶中，加10ml乙腈使溶解，加流动相稀释至刻度。

1.4溶液分离：取对照溶液10ml注入液相色谱仪，记录色谱图，确定红霉素B保留时间。再取样品溶液10ml，注入液相色谱仪进行分离，在红霉素B对照品出峰起始时间，开始收集红霉素B溶液，至红霉素B峰尾部结束，置4℃左右冰箱中保存。反复收集若干次，合并。

1.5红霉素B纯化：将洗脱液pH调为5.0，加入醋酸丁酯适量，振摇，静置分层，弃去有机相。再将水相pH调节为10.2，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，于60℃蒸干，即得红霉素B纯品。

1.6红霉素B含量测定：取自制红霉素B纯品，按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件，以欧洲药典委员会红霉素B对照品为参考，对自制红霉素B纯品含量进行测定，结果为92.8％。

实施例2

1、红霉素B的分离：

1.1色谱条件：色谱柱：Sinochrom300A ODS-AP10um；流动相：以磷酸盐溶液(取磷酸氢二钾8.7g，加水1000ml，用20％磷酸调节pH值至8.2)-乙腈(45：55)为流动相；流速：24ml/min；检测波长：210nm。

1.2仪器型号：大连依利特P230制备液相色谱仪

1.3溶液制备：

样品溶液制备：抽取一批红霉素B含量较高的样品，准确称取1.0g，加乙腈10ml使溶解，加流动相稀释至100ml，摇匀，即可。

对照溶液制备：精密称取红霉素B对照品10mg，置50ml容量瓶中，加10ml乙腈使溶解，加流动相稀释至刻度。

1.4溶液分离：取对照溶液10ml注入液相色谱仪，记录色谱图，确定红霉素B保留时间。再取样品溶液10ml，注入液相色谱仪进行分离，在红霉素B对照品出峰起始时间，开始收集红霉素B溶液，至红霉素B峰尾部结束，置4℃左右冰箱中保存。反复收集若干次，合并。

1.5红霉素B纯化：将洗脱液pH调为5.3，加入醋酸丁酯适量，振摇，静置分层，弃去有机相。再将水相pH调节为10.0，用三氯甲烷萃取，弃去水层，三氯甲烷层再用纯化水洗两次，收集三氯甲烷层，于60℃蒸干，即得红霉素B纯品。

1.6红霉素B含量测定：取自制红霉素B纯品，按《中国药典》2010版红霉素含量测定方法色谱条件，以欧洲药典委员会红霉素B对照品为参考，对自制红霉素B纯品含量进行测定，结果为93.4％。