[发明专利]一种用于糖尿病自身抗体6项联检试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于糖尿病自身抗体6项联检试剂盒。

背景技术

糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状，糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。糖尿病已经成为继心脑血管、癌症以外危害人类健康的第三大疾病。

临床上根据病因和发病机制分为1型糖尿病(T₁DM)、2型糖尿病(T₂DM)及其他类型。T₁DM又称免疫介导性糖尿病，它是由于自身免疫系统破坏胰岛细胞，使胰岛素的合成和分泌减少或完全缺乏的自身免疫性疾病；T₂DM主要是因为胰岛素抵抗伴相对性胰岛素不足而引起。LADA全称为成人隐匿性免疫性糖尿病（latent autoimmune diabetes in adult,LADA），其介于1型糖尿病和2型糖尿病之间，属于免疫介导型1型糖尿病的亚型，其患病率约占初诊2型糖尿病患者的10%-15%（患病率是1型糖尿病的2倍），其中胰岛B细胞功能衰退速度是2型糖尿病患者的3倍。由此可知，对糖尿病进行准确的分型是对其实施预防及治疗的基本前提。检测糖尿病患者自身抗体是对糖尿病进行准确分型的主要方法。目前确认的糖尿病自身抗体包括胰岛细胞抗体（ICA）、谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、胰岛素抗体（IAA）酪氨酸磷酸抗体(IA-2A)、羧基肽酶抗体（CPH-A）和锌转运蛋白8抗体（ZnT8-A）等。

目前常用免疫组化法、免疫荧光法、酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（RIA）检测。但是上述方法检测时间长，对辅助设备的要求较高，且仅能检测单一自身抗体，单一自身抗体检测的敏感性仅为39%-68.8%。

免疫印迹(IB)法或称蛋白免疫印迹试验（Western Blot,WB）是目前国内测定可提取性核抗原（ENA）多肽抗体的主要方法，因为它结合了聚丙烯酰凝胶电泳的高分辨率和免疫标记技术的高特异性及敏感性的优点。近年来被卫生部临检中心推荐为爱滋病等传染性疾病的确认试验。但将免疫印迹法用于糖尿病自身抗体6项联检在国内尚未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种用于糖尿病自身抗体6项联检试剂盒。本发明提供的试剂盒对T₁DM、T₂DM和正常人血清中ICA、GADA、IAA、IA-2ACPH-A和ZnT8-A等6种抗体联合检测，对Ⅰ型糖尿病诊断有高度敏感性(可达98%)和特异性(可达99.6%)，为糖尿病的分型诊断提供高效、快捷的检测手段。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于糖尿病自身抗体6项联检试剂盒，包括检测印迹膜和标准带；

检测印迹膜依次包括起始带、检测带和质控带；检测带转印有胰岛细胞抗原、酪氨酸磷酸酶抗原、谷氨酸脱羧酶抗原、锌转运蛋白8抗原、羧基肽酶抗原、胰岛素自身抗原；

标准带的制备方法为：

取胰岛细胞抗体、酪氨酸磷酸酶抗体、谷氨酸脱羧酶抗体、锌转运蛋白8抗体、羧基肽酶抗体、胰岛素自身抗体经梯度不连续电泳后转印至硝酸纤维素膜，显色后，获得标准印迹膜，根据标准印迹膜上各阳性区带分别与起始带、质控带的相对距离，获得标准带。

同一胰岛细胞蛋白抗原因电泳时的微笑效应（在电泳槽中心的抗原移动速度大于两边），使相同的胰岛细胞蛋白抗原带不能在一条直线上，与标准带比对时会造成结果误判。本发明在制备试剂盒的过程中，利用梯度不连续电泳解决了这一难题，不仅保证了结果判断的准确性，而且也是大批量生产的前提。

ICA作为一类自身抗体，发现于1974年，当时认为与胰岛的所有细胞均存在反应，T₁DM儿童中，70%-80%在明确诊断时ICA为阳性。ICA检测是临床上应用较早的指标，在多数试验室中采用免疫组化的方法来进行测定，虽然具有一定的灵敏度和特异性，但由于受检测方法学的限制，使检测结果在不同的试验室中有一定差异。

Palmer等在1983年最先检出IAA后，指出T₁DM自身免疫过程并非仅限于胰岛细胞膜和胞浆抗原，胰岛素分子作为抗原也参与T₁DM的自身免疫过程。