[发明专利]一种落花生茎叶药材的指纹图谱建立方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析检测领域，涉及一种落花生茎叶药材的指纹图谱建立方法，特别涉及河北产落花生茎叶药材的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱建立方法。

背景技术

中药作为多组分复杂体系，其化学成分众多，测定少数几种有效成分或指标成分不足以确保药材或制剂的质量，而宏观地综合分析已成为必然的趋势，中药指纹图谱这一质量控制模式便顺应了这个趋势。

中药指纹图谱是指中药材经过适当的处理后，采用一定的分析手段和仪器检测得到的能够标识其中各种组分群体特征的共有峰的图谱，是以系统的化学成分研究和药理学研究为基础，经化学测定或基因鉴定得到的某种或某产地中药及其制剂所共有的、具有特异性的组分群体（某类或数类成分）的特征图谱或图像。

中药指纹图谱能比较全面的反映中药中所含化学成分的种类与数量，尤其是在现阶段绝大多数有效成分没有明确的情况下，虽然它不能代替含量测定，但它比测定任何单一成分所提供的信息都丰富，能更好地反映中药的内在质量，大大提高中药质量控制和评价的技术水平和科技含量，成为建立现代中药质量标准体系的核心。

落花生茎叶收载于《湖南省中药材标准》，为豆科落花生属植物落花生Arachis hypogaea L.的干燥地上部分。本品味甘，性平。具有散瘀消肿，解毒，止汗的功效，用于治疗跌打损伤，各种疮毒和盗汗等症。近年来随着对其化学成分和药理活性的深入研究，使得原本作为农作物废弃物的落花生茎叶药材得到了合理有效的利用，以落花生茎叶药材为主要原料的制剂，如落花安神合剂、降压避风片等被广泛应用于临床。

现有落花生茎叶药材的质量标准仅从外观性状、简单的薄层鉴别角度对其进行控制，显然不能全面准确表征其内在质量。指纹图谱作为中药及其提取物成方制剂质量控制的最优方法，已被大家广为采纳。采用中药指纹图谱方式，一方面可以通过指纹图谱的特征性有效的鉴别样品的真伪和产地，另一方面通过对主要指纹图谱特征峰的面积或比例的控制，能有效控制药材的质量，确保其质量的均一和稳定，从而保证药材的安全性和有效性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种建立落花生茎叶药材指纹图谱的方法，该方法建立的指纹图谱能够全面表征落花生茎叶的药物活性组分，从而表征和控制其内在质量。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供了一种落花生茎叶药材指纹图谱的建立方法，所述方法包括采用高效液相色谱法检测落花生茎叶药材成分，其中，所述高效液相色谱法的条件包括：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：

0~15min，流动相A为0~5%，流动相B为100%~5%；

15~60min，流动相A为5%~30%，流动相B为95%~70%；

60~80min，流动相A为30%~50%，流动相B为70%~50%；

80~100min，流动相A为50%~100%，流动相B为50%~0%。

优选地，所述高效液相色谱法的条件还包括：

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：286nm；

理论塔板数按原儿茶酸峰计算，应不低于6000。

优选地，上述建立方法还包括通过以下步骤制备对照品溶液：取原儿茶酸对照品适量，加入甲醇溶解制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

并且，上述建立方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液：取河北产落花生茎叶药材1.0g，置于烧瓶锥形瓶中，加入70%体积分数甲醇水溶液100ml，超声提取1h，提取液浓缩至干，用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得。

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；Diamonsil钻石1代C18，5μm，2.5×460mm；

流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.2%体积分数甲酸水溶液，进行梯度洗脱；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

紫外检测波长：286nm。

所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比：