[发明专利]用于生物样本核酸检测的分子内标质控方法及其试剂盒

说明书

 

技术领域

本发明涉及生化检测技术及临床分子诊断领域，特别涉及一种用于生物样本核酸检测的分子内标质控方法。

背景技术

分子生物学诞生以来，一直在分子水平上研究生物大分子的结构和功能，以揭示生命的本质。借助探索技术手段不断升级提高，分子生物学研究所取得的成果已经为人类了解生命起源、遗传进化、掌握遗传规律做出了卓越贡献。核酸作为一类生物大分子在生物遗传进化中起着举足轻重的作用，也倍受科学研究者关注。如今围绕核酸展开的研究种类繁多，所用到的研究技术手段也是日新月异，相关的核酸检测应用也已经在医疗、科研领域广泛铺开。目前，核酸相关的检测在医疗领域中以疾病的临床分子诊断最具代表性，其检测快速高效、结果准确率高等优点显而易见，但由于样本量大导致操作步骤易出错、对检测本身的质控手段单一等缺点也逐渐突显出来。

医疗科学技术迅速发展，各种诊断、诊疗的方法不断推陈出新，使得临床诊断技术正在向着个体化、数字化、自动化、微量微创、准确度提升等方向发展。为了保证大批量快速检测结果的真实准确性，必须在整个临床检测过程中做好质控措施，以及时的发现并解决问题；避免因为缺少相应质控体系，得出错误的检测结果引起医疗事故。

分子诊断技术不同于以往诊疗机构所做的生化检测项目，它代表了未来医学诊断检测领域的发展方向，现阶段简单的质量控制措施很难满足分子诊断要求，诊断检测结果的真实、准确性无法得到全面保证，从而限制了分子诊断技术在临床诊断领域全面铺开和发展。

目前，国内生物相关科研机构及医院的临床诊断都具有样本量大、检测程序繁琐，如果没有购买程控模块化自动检测仪器，则可能在核酸检测实验过程中存在较多影响结果准确率的因素，例如较为常见的影响因素有样本混淆或样本相互污染等问题。为了排除整个检测过程中的人为因素干扰等情况，现在较大型的临床诊断检测机构都已经参照美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）MM1-A2文件中所述的步骤将质控以检测过程划分，即分析前质控、分析中质控、分析后质控，根据不同阶段的要求建立起从样本采集、分配、检测、结果分析等较完整的质控体系；例如分析前质控步骤中对样本采集识别和验收，国内医院普遍采用的识别质控方法是条形码标识区别，即在收集样本时，针对每个个体样本分配一个条形码并做好对应记录，在检测过程中样本始终保证对应此条形码。然而，此种质控是宏观的外部质控方法，面对如今越来越多的分子层级的检测项目，仍然可能在检测过程中发生混淆污染等情况，针对样本相互区分的问题缺乏微观分子化手段，大大降低了分析前质量控制的效力，影响了整个检测过程的准确性。由此可见，新的质量控制方法对于新兴的核酸检测应用及分子诊断技术重要性显而易见。

经过调查发现在样本质控过程中采用构建质控分子内标对样本进行识别的质控体系，在国内外与核酸检测相关领域尚处空白阶段。在现有的临床诊断检测领域也尚无利用分子内标对样本进行标记，通过后续实验检测内标物来区分样本及样本相互污染的质控方法。本发明为所面临的实际问题提供了一条有效的解决途径。

发明内容

本发明所要解决的第一方面技术问题是克服现有与核酸检测相关领域的空白，提供一种在核酸检测样本质控过程中的，以对样本进行识别、质量监控的生物样本核酸检测的分子内标质控方法。

本发明的所要解决的第二方面技术问题，提供一种试剂盒，其含有上述分子内标序列。

 

为了解决现有技术中的这些问题，本发明第一方面提供的技术方案是：用于生物样本核酸检测的分子内标质控方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采集待测生物样本备用;

（2）制备一条或多条有别于待测样本核酸序列的特异外源核酸序列，所述的特异外源核酸序列与待测样本的同源性不高于99%，同一批处理的不同待测样本分别与不同的特异外源核酸序列混合;

（3）将上述的特异外源核酸序列加入采集后未处理的待测样本并混合均匀，做好对应记录并一起进行后续处理，完成待测样本的核酸检测分析；

（4）在需要质控时，可以采用单独一个反应体系检测质控分子内标，或采用与待测样本核酸检测体系同一个体系对质控分子内标和样本同时检测，根据检测的质控分子内标的信息核对检测结果是否对应正确的待测样本。