[发明专利]一种他立韦林的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是他立韦林的一种新的制备方法。

背景技术

他立韦林（Taribavirin，商品名viramidine）的化学名称是1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-甲脒盐酸盐，为核苷类似物，是一种能通过腺苷脱氨酶作用转化为利巴韦林的前药，用于治疗丙肝。与利巴韦林相比，他立韦林可降低慢性丙肝患者的贫血发生率，同时可使持续病毒学应答增加。他立韦林具有更小的副作用以及更好的疗效，有可能取代利巴韦林成为安全有效的慢性丙肝治疗药物。

目前，他立韦林的合成主要为化学法。化学法参见文献（Journal of Medicinal Chemistry,16(8),935～937(1973)；Journal of Medicinal Chemistry,32(7),1447～1449(1989)；WO2001/060379）。这类方法采用利巴韦林或者四乙酰核糖为起始原料，价格昂贵；缩合反应温度高达150℃或以上，并且成熔融状态，工业生产难以操作；反应及纯化步骤繁琐，副产物多，产率低，综合成本高；大量使用有机溶剂，安全环保要求高。

上述表明，采用现有技术，需要利用核苷制备四乙酰核糖或者制备利巴韦林作为起始原料，增加成本，并且安全环保要求高，其工业化受到了成本和安全环保的限制。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种他立韦林的制备方法，工艺简便，生产成本低廉，产物得率高。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种他立韦林的制备方法，采用乙酰短杆菌Brevibacterium acetylicum ATCC39311菌株作为菌种，包括如下步骤：A、将菌种先进行发酵得菌种发酵液，再将菌种发酵液进行催化底物反应，所述的催化底物反应是指在菌种发酵液中加入底物，在55℃～65℃进行酶催化反应20小时～25小时得催化反应液；B、催化反应液的后处理：步骤A催化反应结束后，加入与催化反应液相比，其重量百分含量为0.1～2.5%活性炭，助滤除菌，滤液真空减压浓缩到有固体析出，冷却到10±1℃，过滤除去固体杂质，滤液加入0.3～1.0倍体积乙醇，冷却结晶，5±1℃过滤收集滤饼，60±5℃下真空干燥，得到1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基；C、氨解反应与纯化：在耐压反应釜中加步骤B的1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基、氯化铵和氨甲醇溶液，且氨甲醇溶液的浓度是10%，30℃～50℃反应15小时～36小时；真空减压浓缩至干，加入自身浓度为90%乙醇溶液结晶，抽滤，滤饼烘干，得到他立韦林。

进一步：在上述他立韦林的制备方法中，所述步骤A的酶反应底物是核苷和3-氰基-1,2,4-三氮唑；核苷浓度为10mmol/L～600mmol/L；所述核苷与3-氰基-1,2,4-三氮唑的摩尔比是1:1～1:1.5；所述的核苷是肌苷、鸟苷或腺苷中的一种或者两种。所述步骤C各物质的摩尔比为1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基:氯化铵等于1:1.0～1:1.5，所述氯化铵与氨甲醇溶液的摩尔比为1:3.8～1:4.2。所述步骤A菌种发酵是指将菌种放入菌种培养基进行发酵处理，所述菌种培养基的重量百分比配制为：葡萄糖0.1%～1.0%，酵母粉1.0%～5.0%，磷酸氢二钾0.35%～1.50%，磷酸二氢钾0.15%～1.50%，氯化钠0.15%～1.00%，自来水90.00%～98.25%，发酵液pH值控制在6.0～6.9。所述步骤A菌种发酵的发酵控制是采用发酵罐通风发酵；罐压为0.010～0.015MPa，发酵温度为35℃～40℃，发酵时间为25小时～35小时。

本发明所涉及的乙酰短杆菌Brevibacterium acetylicum ATCC39311菌株（公知菌株），购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,简称ATCC，网址http://www.atcc.org/)。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

1）菌种发酵液催化反应相比化学法条件温和。其特征为：采用酶液催化缩合反应，生成1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-氰基。

2）原料成本低。其特征为：采用大规模发酵生产的核苷为起始原材料，比现有技术中的四乙酰核糖或者制备利巴韦林容易获取，价格低廉。