[发明专利]人工合成人肠激酶基因及其表达纯化方法有效
| 申请号： | 201210410156.8 | 申请日： | 2012-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN102911955A | 公开（公告）日： | 2013-02-06 |
| 发明（设计）人： | 钮利喜;杨斌盛;石亚伟;李娇;吉雪雪 | 申请（专利权）人： | 山西大学 |
| 主分类号： | C12N15/57 | 分类号： | C12N15/57;C12N15/63;C12N1/21;C12N9/64;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 山西五维专利事务所(有限公司) 14105 | 代理人： | 杨耀田 |
| 地址： | 030006 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人工 成人 肠激酶 基因 及其 表达 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种人工合成的人肠激酶轻链（hEKL）基因，其特征在于核苷酸序列是SEQ NO 1。
2.一种表达载体，其特征在于，它含有权利要求1所述的人肠激酶轻链基因。
3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，它含有Tac启动子。
4.一种工程菌，其特征在于，它含有权利要求3所述的表达载体。
5.如权利要求4所述的工程菌，其特征在于，它是大肠杆菌。
6.如权利要求1所述的人工合成的人肠激酶轻链基因的表达纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）构建含有人工合成的hEKL基因的重组质粒pMAL-s-hEKL；
2）将重组质粒pMAL-s-hEKL转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中，得到含有重组质粒的工程菌株；
3）将工程菌接种到LB培养基溶液中培养，当工程菌培养液浓度OD600nm达到0.6-0.8时，加入终浓度为0.1-1.0mM的IPTG，37℃诱导表达3-6小时，离心收集菌体，超声破碎后离心，取上清，
4）用Amylose亲和层析的方法纯化得到目的蛋白MBP-hEKL。
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