[发明专利]源于B10BR的Nrf2过表达黑素细胞株及其应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一种源于B10BR的Nrf2过表达黑素细胞株，及其在白癜风抗氧化药物筛选中的应用。

（二）背景技术

白癜风是由于表皮黑素细胞缺失引起的色素障碍性皮肤病，其发病机制不明确，临床治愈困难。近几年人们对于黑素细胞缺失机制有了新认识：内源性损伤导致了免疫应答，进而引起黑素细胞自毁，引发白癜风（J Invest Dermatol. 2005, 124(4): 798-806.）。氧化应激易引起细胞损伤，在进展期和稳定期的白癜风患者中都发现有氧化-抗氧化失衡的现象，这表明氧化应激对白癜风的发病乃至进展过程中都有重要的影响，而且这些现象的研究已直接引起临床治疗理念的革新，抗氧化治疗已成为白癜风临床治疗新策略。

存在于植物、水果、蔬菜及中药中的天然的抗氧化剂不尽其数，包括多酚类化合物、黄酮类化合物、皂苷类化合物和多糖类等。绿茶提取物、槲皮素等抗氧化物能够减少过氧化氢诱导的黑素细胞死亡，具有抗氧化保护作用，临床疗效显著，可以促进白癜风患者皮损明显复色，而被普遍认为具有抗氧化作用的维生素C、叶酸、硒等对黑素细胞的抗氧化保护作用并不显著，这表明不同抗氧化剂对黑素细胞的保护作用是不同的。目前人们在白癜风研究中所用的抗氧化剂存在选择上的随机性，主要原因是目前尚无针对白癜风的高通量抗氧化药物筛选体系。药物筛选体系的建立是寻找和发现新药的重要条件之一，以往经典的抗氧化模型如过氧化氢等的检测方法比较复杂且有着明显的缺陷，因为它们不能反映化合物的抗氧化机制（如抗氧化蛋白之间的相互作用）、不能高通量和微量化检测。分子与细胞水平的筛选体系具有材料用量少，药物作用机制明确，可进行大规模筛选等特点，已成为目前药物筛选的主要方法。因此，建立白癜风抗氧化药物筛选体系是抗氧化药物筛选的重要基础，对抗氧化治疗白癜风具有重要意义。

人体内具备一套完整的防止活性氧自由基损伤的抗氧化酶（如谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-PX）和过氧化氢酶（CAT）等），维持体内自由基产生和清除的平衡，一旦平衡被破坏就会导致氧化应激。新近发现的核因子E2相关因子2（NF-E2-related factor2, Nrf2）是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子，属于CNC（cap‘n’collar）转录因子家族，由bZIP、碱性区、酸性区、和cap‘n’collar区组成，Nrf2基因位于染色体2q31，全长2884bp，其蛋白分子量为57 kDa（Cancer Lett. 2006, 233(2): 208-218.）。生理状态下，Nrf2与胞质蛋白Keapl（Kelch-like ECH-associated protein1）偶联并被锚定在胞浆，且被泛素蛋白酶体途径迅速降解。氧化应激源作用下，Nrf2从Keapl解离，然后稳定状态的Nrf2转位进入细胞核，与抗氧化反应元件（ARE）上GCTGAGTCA位点结合，启动ARE调控的Ⅱ相解毒酶基因（血红素氧合酶(HO-1)和NADPH醌氧化还原酶1（NQO1））和抗氧化酶基因的表达，提高细胞抗氧化应激能力（Free RadicBiol Med, 2004, 36(10): 1208-1213.）。

鉴于Nrf2是抗氧化反应的中枢调节者，Nrf2-ARE是调节Ⅱ相解毒酶和抗氧化基因的转录激活的作用靶点，本发明拟通过构建包含Nrf2的真核表达载体并包裹慢病毒质粒，感染鼠永生化黑素细胞株B10BR，获得Nrf2过表达黑素细胞株Nrf2-B10BR，可以用于进一步构建体内外抗氧化药物筛选模型，从而深入研究黑素细胞中的抗氧化药物作用机制，为白癜风临床治疗提供有应用价值的抗氧化药物，具有较好的临床应用前景。

（三）发明内容

本发明的目的是提供一株源于B10BR的Nrf2过表达的黑素细胞株及其在白癜风抗氧化药物筛选中的应用。

本发明采用的技术方案是：

一种源于B10BR的Nrf2过表达黑素细胞株Nrf2-B10BR，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏日期：2012年9月25日，保藏编号：CCTCC No: C 2012124。