[发明专利]鉴别纯冬虫夏草粉的方法

说明书

本申请是申请日为2010年04月21日、申请号为201010151881.9、发明名称为《显微染色鉴别冬春夏草粉的方法》的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于药材鉴别领域，具体涉及一种显微染色鉴别冬虫夏草粉的方法。

背景技术

在我国传统的医药中，冬虫夏草一直就是高级滋补品，药用地位十分显著，与人参、鹿茸并称为“三大补品”。随着各相关学科领域的深入研究，近年来不断有虫草新的种类、新的分布的报道，化学成分不断被分离、鉴定，而有关免疫、抗肿瘤等多方面的药理、药效学研究充分证实了冬虫夏草的药效。由于冬虫夏草的特殊生长环境、特殊的地理环境及重要的经济价值，使得人们的研究兴趣倍加强烈，尤其是对冬虫夏草及其代用品的研究更是十分活跃。

目前市场流通与销售的纯冬虫夏草粉，由于被制成了一定的剂型，很难区分真伪，虽然可以用检验仪器的手段，证明冬虫夏草的若干标记物的存在，如虫草素与腺苷的含量，但这些标记物容易买到，而且并不贵，理论上可以用来作添加剂，所以理化检验既不能检出杂质，也不能辨别赝品。由于虫草粉价格高昂，为了保护消费者的利益，本领域需要建立准确鉴定纯冬虫夏草粉真伪的方法。

发明内容

本发明要解决的是市场流通与销售的纯冬虫夏草粉难于分真伪的技术问题。本发明解决该问题的技术方案是提供一种准确鉴别冬虫夏草粉的方法。该方法包括以下步骤：取待检冬虫夏草粉，染色制成涂片；所述染色为分别进行苏木精-伊红-碘液染色、番红-固绿染色、斯氏染液-碘液染色中的至少一种染色；

将制成的涂片于显微镜下进行显微观测，如每片均能清晰观察到冬虫夏草的特有结构，且没有碘液染色下的明显蓝色斑点，并且没有观测到明显的植物组织，即可判断为纯冬虫夏草粉，否则为不纯的冬虫夏草粉。

其中，本发明鉴别纯冬虫夏草粉的方法中所述的冬虫夏草的特有结构为冬虫夏草的虫体菌丝体、冬虫夏草的虫体表皮层、冬虫夏草的虫体肌肉组织、冬虫夏草的子座菌丝体或冬虫夏草的子座表皮层中的至少4种。

其中，本发明鉴别纯冬虫夏草粉的方法中所述的冬虫夏草的染色方法为滴加苏木染液10min染色后水洗5min，然后依次分别用50％、75％、95％乙醇梯度洗，然后滴加伊红染液染色5min，然后滴加碘液染色5min，然后依次分别用50％、75％、95％、100％的乙醇梯度洗涤，后置于二甲苯液中5～10min以完成染色。

其中，本发明鉴别纯冬虫夏草粉的方法中所述的冬虫夏草的染色方法为将涂片用50％乙醇浸泡后滴加番红染液25min染色，然后依次分别用50％、75％、95％乙醇梯度洗涤，然后滴加固绿染色1min，然后依次分别用95％、95％、100％、100％的乙醇梯度洗涤，后置于二甲苯与100％乙醇混合液中5～10min，再置于纯二甲苯液中5～10min以完成染色。

其中，本发明鉴别纯冬虫夏草粉的方法中鉴别冬虫夏草的特有结构时，可以用同种方式染色的具有冬虫夏草特有结构的标准切片为标准。还可以用冬虫夏草的虫体横切片和冬虫夏草子座横切片作为参考标准。以防止检验人员由于经验不足产生误判。

其中，本发明鉴别纯冬虫夏草粉的方法中对每批待检的纯冬虫夏草粉物料取样4～10份。一般取6份进行检测，以提高准确度。对每批待检的纯冬虫的每张涂片中的每1张上都要有至少4种特有结构才为真品。

具体而言，本发明方法可采用以下的详细实施过程：

取待检冬虫夏草粉4～10份，一般取6份。将取的样染色制成涂片；所述染色为分别进行苏木精-伊红染色、番红-固绿染色、斯氏染液染色中的至少一种染色，并进行碘液染色；

其中苏木精-伊红染色的方法为滴加苏木染液10min染色后水洗5min，然后依次分别用50％、75％、95％乙醇梯度洗涤，然后滴加伊红染液染色5min，然后滴加碘液染色5min,然后依次分别用50％、75％、95％、100％的乙醇梯度洗涤，后置于二甲苯液中5～10min以完成染色。

其中番红-固绿染色的方法为将涂片用50％乙醇浸泡后滴加番红染液25min染色，然后依次分别用50％、75％、95％乙醇梯度洗涤，然后滴加固绿染色1min，然后依次分别用95％、95％、100％、100％的乙醇梯度洗涤，后置于二甲苯与100％乙醇混合液中5～10min，再置于纯二甲苯液中5～10min以完成染色。