[发明专利]锌离子作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用及其测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，主要是一种在治疗糖尿病方面上的锌离子作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用及其测定方法。

背景技术

根据《糖尿病医学》Diabate Medicine，10，688（1993）报道，α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制存在于小肠微绒毛的α-葡萄糖苷酶，延缓碳水化合物的吸收，延迟双糖、低聚糖、多糖的吸收，延迟并减低餐后血糖升高，可作为一种新型的糖尿病治疗药物。α-葡萄糖苷酶抑制剂对改善高血糖症状和高血糖所致的肥胖症、糖尿病等各种疾病很有用。

目前临床常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂为阿卡波糖（Acarbose，拜唐苹）或其类似物，是由微生物发酵制得的，可竞争性抑制多种α-葡萄糖苷酶(如蔗糖酶、麦芽糖酶、淀粉葡萄糖苷酶等)的活性，对糖尿病有很好的疗效，但长期使用可能会出现胃肠胀气、腹痛、腹泻等消化道副反应，且制药成本较高。因此，寻找更为安全高效的α-葡萄糖苷酶抑制剂成为研究热点。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种锌离子作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用及其测定方法，其作用同阿卡波糖类似，且具有来源丰富、廉价、易于制备和容易摄取等特点。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。锌离子作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用为：Zn²⁺通过抑制酶活性从而减缓或抑制碳水化合物的消化吸收，可作为II型糖尿病的治疗药物。锌离子作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的测定方法为：

1）配制0.6mM（毫摩尔/升）醋酸锌，用50mM乙磺酸(pH 6.5)缓冲液逐级稀释成不同浓度，α-葡萄糖苷酶用50mM磷酸缓冲液（pH7.4）配制成3μM α-葡萄糖苷酶液；

2）将不同浓度的醋酸锌30μL与等体积的α-葡萄糖苷酶液混合，设置不含醋酸锌的30μL缓冲液与等体积的α-葡萄糖苷酶混合作为空白对照，以上体系25℃保温3hr后测定酶活力。

作为优选，用上述50mM磷酸缓冲液（pH7.4）配制10mM pNPG溶液，取600μL分别与上述等体积的醋酸锌溶液和乙磺酸缓冲液（空白对照）混合，作为测定α-葡萄糖苷酶活性的底物体系。

所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂的活力测定方法为：先将1mL预热至37℃的含不同浓度Zn2+的pNPG底物置于比色皿中，加入5μL对应Zn²⁺浓度的α-葡萄糖苷酶溶液，迅速混合，通过岛津公司UV-1800紫外可见分光光度计检测400nm处每分钟吸光值变化来指示反应速度v值，从而表征酶活性的大小，其测定温度为37℃。

本发明的有益效果为：锌离子对α-葡萄糖苷酶具有强效的抑制作用，锌离子可成为II型糖尿病治疗的有效的作用物质。

附图说明

图1是Zn²⁺对α-葡萄糖苷酶的抑制影响图；

图2是v和[E]的关系图；

图3是Lineweaver-Burk双倒数图；

图4是根据图3求得的Slope值对Zn²⁺浓度作图；

图5是Zn²⁺抑制α-葡萄糖苷酶的时间过程图；

图6是根据图5进行的时间过程半对数曲线分析图；

图7是Zn²⁺对α-葡萄糖苷酶内源荧光的影响图；

图8是α-葡萄糖苷酶内源荧光最大荧光强度处波长随Zn²⁺浓度变化图；

图9是α-葡萄糖苷酶ANS结合的最大荧光强度随Zn²⁺浓度变化图；

图10是α-葡萄糖苷酶的序列比对图；

图11是α-葡萄糖苷酶的计算机结构模拟图；

图12是α-葡萄糖苷酶与Zn²⁺作用的初始结构图；

图13是α-葡萄糖苷酶与Zn²⁺的分子动力学模拟图；

图14是α-葡萄糖苷酶与Zn²⁺结合的结构模拟图。

具体实施方式