[发明专利]一种用于体重控制的基因芯片、制备方法、使用方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于体重控制的基因芯片，其特征在于：它包括固相载体和固定于该固相载体上用于与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点检测的特异性寡核苷酸探针，所述与肥胖相关基因单核苷酸多态性位点为：

与肥胖风险相关SNPs：rs3751812、rs10871777

与饮食有关的肥胖基因SNPs：rs1799883、rs1801282、rs1042714、rs5082、rs662799

与运动有关的肥胖基因SNPs：rs4994、rs1042713、rs1800588、rs1801282

所述的寡核苷酸探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1-20所示，具体见表1：

表1用于体重控制的基因芯片的寡核苷酸探针序列

2.根据权利要求1所述的用于体重控制的基因芯片，其特征在于：所述固相载体为硝酸纤维素膜、尼龙膜或载玻片，所述的固相载体经不同的化学修饰使其表面带有可以固定核酸分子的活性基团。

3.根据权利要求1所述的用于体重控制的基因芯片，其特征在于：所述用于体重控制的基因芯片包括阳性对照探针和阴性对照探针，所述的阳性对照探针序列如SEQ ID No.21所示，所述的阴性对照探针序列如SEQ ID No.18所示。

4.一种用于体重控制的基因芯片的制作方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)将固相载体预处理，待用；

(2)根据表1所设计的探针序列，如SEQ ID No.1-20所示，人工合成每条寡核苷酸芯片探针；

(3)将上述各寡核苷酸芯片探针溶解在点样液中，点样固化即得。

5.根据权利要求4所述的用于体重控制的基因芯片的制作方法，其特征在于：所述固相载体为载玻片，所述的预处理为将载玻片用铬酸洗液洗涤，浸泡过夜，水洗，20％～25％氨水浸泡中过夜，水洗，然后浸入氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，用冰醋酸调节pH值至4.0～6.0，乙醇超声清洗，烘干4～5小时，戊二醛醛基化处理；

所述每条寡核苷酸芯片探针在合成时5’端经氨基基团修饰；

所述点样时每点点样体积约为0.4～0.6nL，点心间距为500～600μm，点直径为200～300μm，每条探针重复点样2～3次；所述的固化处理为室温放置24～26小时固化。

6.一种试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-3中任一项所述的用于体重控制的基因芯片。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：它还包括用于与肥胖相关基因多态性位点扩增对应所需的引物，其序列如SEQ ID No.22-39所示，和阳性对照扩增对应所需的引物，其序列如SEQ ID No.40-41所示，具体见表2：

表2PCR扩增对应所需的引物序列

8.权利要求1-3任一项所述的用于体重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于：它包括以下步骤：

1、待测样本的制备：

(1)提取样品DNA；

(2)采用各与肥胖相关基因多态性位点及阳性对照肌动蛋白扩增对应所需的引物分别进行PCR扩增；

(3)PCR结束后经电泳检测确认，然后回收目的片段条带；

2、荧光素标记

对步骤1中回收得到的目的片段和阴性对照品即点样液进行荧光标记；

3、芯片杂交实验

将步骤2中标记后的目的片段和阴性对照品对应滴加到基因芯片上，与固定于上述基因芯片上的寡核苷酸芯片探针进行杂交，然后进行洗涤处理；

4、扫描和结果判定

扫描分析获取杂交信号，判定得到结果。

9.根据权利要求8所述的用于体重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于：步骤1(2)中用于肥胖基因多态性位点扩增对应所需的引物序列如SEQ ID No.22-39所示，阳性对照探针扩增所需的引物序列如SEQ ID No.40-41所示，见表2。

10.根据权利要求8所述的用于体重控制的基因芯片的使用方法，其特征在于：它还包括将步骤4得到的各位点结果按照与肥胖风险相关的基因位点、与饮食有关的肥胖基因位点、与运动有关的肥胖基因位点对结果进行分类统计分析。